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构建crispr/cas9系统时载体总是自连
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各位老师好。我在构建crispr/cas9系统时，按照张峰博士给出的protocol一步步做，用的是px458质粒，酶切后跑胶显示切开，胶回收正常。然后做序列的退火和磷酸化。之后的连接与原protocol稍有不同，采用T4连接酶16度过夜，之后转化挑菌摇菌测序。测序结果全部是载体自连。后来也试过将载体量减半，依旧没有改观，试过好多遍了还是这样。求助各位老师，如何才能解决载体自连的问题。 发自小木虫Android客户端 |
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