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新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 3
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在线: 1.8小时
虫号: 5881972
注册: 2017-03-08
性别: GG
专业: 微生物生理与生物化学

[求助] 各位大咖好，我有个引物设计方面的问题想请教一下

我的科研课题是外源基因的原核表达相关内容。这段外源基因是已知的，首先我要克隆出这段目的基因，然后连接到克隆载体（pMD18-T）上，连接成功后再转入大肠杆菌（DH5α）中进行抗性筛选，选出阳性单克隆进行菌落PCR验证，测序。最后进行双酶切、表达载体的连接以及蛋白表达。但我有一个问题，就是我设计的引物上的酶切位点能否是克隆载体（pMD18-T）上有的多克隆酶切位点。因为按照理论来说，即使克隆载体上有我引物上的酶切位点，我在双酶切的时候也能得到目的条带。但我不能确定这样做有没有不严谨的地方会影响后续试验及文章的发表。所以请教一下各位大咖。。。现在这里谢谢各位了

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