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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助gateway BP反应遇到的问题
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llearn

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 伤何处 at 2017-06-08 13:32:10
是很贵的....我们有时候不急着用的话 会和销售买那种做了免税的的，那个会便宜一些。
那你看能不能找其他实验室借一点咯...

嗯嗯，好的，谢谢啦！
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11楼2017-06-08 14:37:03
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cxh90

新虫 (著名写手)
板子有没有被污染

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12楼2017-06-09 07:50:32
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llearn

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 伤何处 at 2017-06-08 13:32:10
是很贵的....我们有时候不急着用的话 会和销售买那种做了免税的的，那个会便宜一些。
那你看能不能找其他实验室借一点咯...

你好，我现在买了新的BP酶，做了两次了。第一次长了但不多，好不容易有一个菌落PCR是阳性结果摇菌酶摇起来，第二次的压根就没长，不知道是什么原因呀，现在不敢再做了，毕竟失败一次就是几百块啊求教啊
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13楼2017-06-20 14:34:03
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伤何处

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by llearn at 2017-06-20 14:34:03
你好，我现在买了新的BP酶，做了两次了。第一次长了但不多，好不容易有一个菌落PCR是阳性结果摇菌酶摇起来，第二次的压根就没长，不知道是什么原因呀，现在不敢再做了，毕竟失败一次就是几百块啊求教啊...

不要有太大压力那，5微升体系用的酶不多，也没有一次几百块的。 我们用的3微升体系，一般是0.6微升BP酶。如果连的片段大于1KB，插入片段200ng左右，载体150ng，酶1微升。虽然斑长得少，但都有阳性。你可以试下
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对也罢，错也罢；正也罢，逆也罢；通途也好，崎岖无妨……但问，吾心坚否？若坚，纵使歧路，以铁心，贯穿而过，亦为大道！不坚，便是坦途，也难登临绝顶，观险峰
14楼2017-06-20 21:58:26
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llearn

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 伤何处 at 2017-06-20 21:58:26
不要有太大压力那，5微升体系用的酶不多，也没有一次几百块的。 我们用的3微升体系，一般是0.6微升BP酶。如果连的片段大于1KB，插入片段200ng左右，载体150ng，酶1微升。虽然斑长得少，但都有阳性。你可以试下...

好的好的，我再试试，谢谢
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15楼2017-06-21 15:55:30
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一叶知秋365

新虫 (小有名气)
请问你们LR表达载体是什么？

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16楼2017-07-12 09:17:38
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芳5992

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 伤何处 at 2017-06-07 14:41:41
我们用的也是DH5a呢，然后一般是过夜培养（大概16h）。蛋白酶K不加没问题，我们其实从来没加过。。。每次反应完直接就转化了...

你好，有着gateway的问题能请教你吗

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17楼2017-08-21 12:40:02
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芳5992

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 一叶知秋365 at 2017-07-12 09:17:38
请问你们LR表达载体是什么？

你好，你的gateway。lr做出来了吗

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18楼2017-08-21 12:41:08
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空白格空白格

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 伤何处 at 2017-06-20 21:58:26
不要有太大压力那，5微升体系用的酶不多，也没有一次几百块的。 我们用的3微升体系，一般是0.6微升BP酶。如果连的片段大于1KB，插入片段200ng左右，载体150ng，酶1微升。虽然斑长得少，但都有阳性。你可以试下...

你好，我可以请问你一个问题吗？我的目的片段是2.4kb，之前做的都是1 ul 75ng/ul的质粒，1 ul  75ng/ul 的 pdnor201，1ul的BP酶，1ul的超纯水，总共5ul，12h 25度反应，做了5 6次了，一直不长单菌落，是不是浓度太低了呢。

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19楼2017-08-24 20:51:46
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伤何处

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
19楼: Originally posted by 空白格空白格 at 2017-08-24 20:51:46
你好，我可以请问你一个问题吗？我的目的片段是2.4kb，之前做的都是1 ul 75ng/ul的质粒，1 ul  75ng/ul 的 pdnor201，1ul的BP酶，1ul的超纯水，总共5ul，12h 25度反应，做了5 6次了，一直不长单菌落，是不是浓度太 ...

你好，按照你这么算 这个不是应该是4微升么？ 一般用TE来补齐，没用过超纯水噢。我记得说明书上写的也是用TE 你可以再看看
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对也罢，错也罢；正也罢，逆也罢；通途也好，崎岖无妨……但问，吾心坚否？若坚，纵使歧路，以铁心，贯穿而过，亦为大道！不坚，便是坦途，也难登临绝顶，观险峰
20楼2017-08-25 18:21:54
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