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llearn

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 伤何处 at 2017-06-08 13:32:10
是很贵的....我们有时候不急着用的话 会和销售买那种做了免税的的,那个会便宜一些。
那你看能不能找其他实验室借一点咯...

嗯嗯,好的,谢谢啦!
11楼2017-06-08 14:37:03
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cxh90

新虫 (著名写手)

12楼2017-06-09 07:50:32
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llearn

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 伤何处 at 2017-06-08 13:32:10
是很贵的....我们有时候不急着用的话 会和销售买那种做了免税的的,那个会便宜一些。
那你看能不能找其他实验室借一点咯...

你好,我现在买了新的BP酶,做了两次了。第一次长了但不多,好不容易有一个菌落PCR是阳性结果摇菌酶摇起来,第二次的压根就没长,不知道是什么原因呀,现在不敢再做了,毕竟失败一次就是几百块啊求教啊
13楼2017-06-20 14:34:03
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伤何处

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by llearn at 2017-06-20 14:34:03
你好,我现在买了新的BP酶,做了两次了。第一次长了但不多,好不容易有一个菌落PCR是阳性结果摇菌酶摇起来,第二次的压根就没长,不知道是什么原因呀,现在不敢再做了,毕竟失败一次就是几百块啊求教啊...

不要有太大压力那,5微升体系用的酶不多,也没有一次几百块的。 我们用的3微升体系,一般是0.6微升BP酶。如果连的片段大于1KB,插入片段200ng左右,载体150ng,酶1微升。虽然斑长得少,但都有阳性。你可以试下
对也罢,错也罢;正也罢,逆也罢;通途也好,崎岖无妨……但问,吾心坚否?若坚,纵使歧路,以铁心,贯穿而过,亦为大道!不坚,便是坦途,也难登临绝顶,观险峰
14楼2017-06-20 21:58:26
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llearn

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 伤何处 at 2017-06-20 21:58:26
不要有太大压力那,5微升体系用的酶不多,也没有一次几百块的。 我们用的3微升体系,一般是0.6微升BP酶。如果连的片段大于1KB,插入片段200ng左右,载体150ng,酶1微升。虽然斑长得少,但都有阳性。你可以试下...

好的好的,我再试试,谢谢
15楼2017-06-21 15:55:30
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一叶知秋365

新虫 (小有名气)

请问你们LR表达载体是什么?

发自小木虫Android客户端
16楼2017-07-12 09:17:38
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芳5992

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 伤何处 at 2017-06-07 14:41:41
我们用的也是DH5a呢,然后一般是过夜培养(大概16h)。蛋白酶K不加没问题,我们其实从来没加过。。。每次反应完直接就转化了...

你好,有着gateway的问题能请教你吗

发自小木虫IOS客户端
17楼2017-08-21 12:40:02
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芳5992

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 一叶知秋365 at 2017-07-12 09:17:38
请问你们LR表达载体是什么?

你好,你的gateway。lr做出来了吗

发自小木虫IOS客户端
18楼2017-08-21 12:41:08
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空白格空白格

新虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 伤何处 at 2017-06-20 21:58:26
不要有太大压力那,5微升体系用的酶不多,也没有一次几百块的。 我们用的3微升体系,一般是0.6微升BP酶。如果连的片段大于1KB,插入片段200ng左右,载体150ng,酶1微升。虽然斑长得少,但都有阳性。你可以试下...

你好,我可以请问你一个问题吗?我的目的片段是2.4kb,之前做的都是1 ul 75ng/ul的质粒,1 ul  75ng/ul 的 pdnor201,1ul的BP酶,1ul的超纯水,总共5ul,12h 25度反应,做了5 6次了,一直不长单菌落,是不是浓度太低了呢。

发自小木虫IOS客户端
19楼2017-08-24 20:51:46
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伤何处

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
19楼: Originally posted by 空白格空白格 at 2017-08-24 20:51:46
你好,我可以请问你一个问题吗?我的目的片段是2.4kb,之前做的都是1 ul 75ng/ul的质粒,1 ul  75ng/ul 的 pdnor201,1ul的BP酶,1ul的超纯水,总共5ul,12h 25度反应,做了5 6次了,一直不长单菌落,是不是浓度太 ...

你好,按照你这么算 这个不是应该是4微升么? 一般用TE来补齐,没用过超纯水噢。我记得说明书上写的也是用TE 你可以再看看
对也罢,错也罢;正也罢,逆也罢;通途也好,崎岖无妨……但问,吾心坚否?若坚,纵使歧路,以铁心,贯穿而过,亦为大道!不坚,便是坦途,也难登临绝顶,观险峰
20楼2017-08-25 18:21:54
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