| 查看: 2662 | 回复: 5 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
关于16s鉴定中假阳性的问题！！
|
||
|
大家好！最近在做菌株鉴定，可是遇到奇怪的问题。 1. 我是用16s通用引物27F和1492R扩增16s片段，可是阴性对照总是在1500bp处出现能看到的条带，不管是我换了水，引物，MIX，消毒PCR仪，消毒枪，还是统统在无菌环境下进行，都会出现假阳性，我将阴性的PCR产物送出测序，两次回来的结果都是Pseudomonas poae，这到底是怎么回事呢？老是假阳存在，那扩增出的菌测序结果就不能保证是正确的，各位大神，能帮忙解答一下原因吗？快崩溃了  2. 明明通过镜检确定是单一菌，菌落PCR测序要么一侧双峰，要么两侧都是双峰；挑单克隆摇菌提取基因组后扩增，送PCR产物还是一侧双峰，这到底是为什么呢？看峰图是从头到尾都是杂峰，但另一端测序的峰图确实好的，双峰的原因就一定是菌不纯吗？要是GC含量高应该是某一段出现杂峰，不该是从头到尾，要是菌不纯，可镜检是单一形态，划板挑单克隆提基因组扩的，怎么会是菌不纯呢？ 困扰的问题，老也解决不了，影响心情，更影响进度，请各位大神帮忙分析一下吧！谢谢大家  |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有75人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
5楼2018-01-22 11:42:11
real-times
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 41.6
- 红花: 1
- 帖子: 37
- 在线: 4.6小时
- 虫号: 6555558
- 注册: 2017-05-18
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
2楼2017-06-02 06:01:40
我用的是MIX，是不是MIX有问题呢？但是有时加菌液的相同条件下扩增不出条带，反而作为阴性对照的水却有条带，那还能说明是MIX的问题吗？ 3楼2017-06-02 15:27:37
4楼2017-12-05 16:20:19
