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FionaD

新虫 (初入文坛)

[求助] 板子长不出菌啊好着急已有3人参与

我们实验室三个人做基因克隆,一个用的pEASY-blunt克隆载体,用的卡纳的板子,我们俩用的blunt E1表达载体,用的氨苄的板子,但是连接转化涂平板之后都长不出菌是为啥啊!昨天用质粒做了对照,质粒就长了满满一板子,说明感受态没问题啊,操作用的都是同一套,而且三个人谁做都长不出来,实在想不出来是哪里有问题啊……各位师兄师姐帮帮忙啊

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FionaD

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 早安wanan at 2017-06-01 10:47:19
这个E1就是挺有意思,我也做过,就长五六个菌,感觉根本就不是,都要绝望了,但是这么几个就都是对的。建议你连的时候不要加水,直接4微产物。

关键是我们每次长两三个都算多了,还很多是假阳性,我总共做7个基因,前面四五个都很正常,就这段时间,板子怎么长都没有菌,昨天我同学又做了连接,用的是4μ升回收产物1μ升载体,今天早上板子上还是什么都没长。

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9楼2017-06-01 12:01:05
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sherlock0088

金虫 (小有名气)

请详细描述你克隆的过程,包括所用的体系(包括但不限于PCR体系,连接体系),克隆片段长度,产物浓度,A260/A260,A260/A230,nanodrop峰图或吸光度曲线,溶解或回收用的是什么

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2楼2017-05-31 11:42:58
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bbass533

禁虫 (小有名气)

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3楼2017-05-31 12:54:02
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cxw123

新虫 (正式写手)

这个应该是T载体吧,最好不要用pfu之类的酶扩增,用普通taq酶扩,很好连接的喔

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4楼2017-05-31 14:31:45
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