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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wy604987664

新虫 (小有名气)

[求助] 双酶切连接不成功 已有3人参与

用赛默飞快切酶Nde1和Sma1双酶切,Nde1和Bamh1双酶切,37℃酶切2小时,连接始终不成功,测序不是没信号就是载体自连。载体确定没问题,酶也没问题。做了3次了,什么问题呢?就差这两个载体实验就做完了,求帮助!!

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stabilized

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
确认不是酶切不成功?双酶切无法使两种酶活力同时最大,所以可能有切不成功的问题。
坚持!
3楼2017-05-19 08:56:11
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fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-19 07:42:31
载体自连的话试试用用去磷酸酶处理一下vector
2楼2017-05-19 03:36:02
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胡奎0925

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我前段也做双酶切,单切都能成功,但双切就是做不出来,我觉得你要确定双切是成功的
宁愿被误会,坚决不解释
4楼2017-05-19 08:58:42
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原来,是这样

金虫 (小有名气)

sma1没记错的话是平末端,连接很困难。这个酶好不好用,最好换个位点。

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5楼2017-05-19 09:47:51
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