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双酶切连接不成功已有3人参与
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用赛默飞快切酶Nde1和Sma1双酶切，Nde1和Bamh1双酶切，37℃酶切2小时，连接始终不成功，测序不是没信号就是载体自连。载体确定没问题，酶也没问题。做了3次了，什么问题呢？就差这两个载体实验就做完了，求帮助！！ 发自小木虫Android客户端 |
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9楼2017-05-19 22:45:42
guoguo_fei
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7楼2017-05-19 11:36:18
fjtony163
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2楼2017-05-19 03:36:02
stabilized
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3楼2017-05-19 08:56:11
胡奎0925
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4楼2017-05-19 08:58:42
原来，是这样
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5楼2017-05-19 09:47:51
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个人建议做TA克隆，然后再酶切目的基因。我试过NdeI 这个内切酶，不是一般的难，7个保护碱基切20小时效率才75%左右。 发自小木虫Android客户端 |
6楼2017-05-19 10:19:35
13349308281
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8楼2017-05-19 16:29:07
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11楼2017-05-21 11:44:54
18楼2017-05-25 12:21:55
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层主，我现在也在做这个双酶切，有木有好办法确定双切成功，我现在是载体两个酶分开切，而且都是同时用两个酶单酶切，结果是，这俩酶都好使，但是目的基因就没法看是不是酶切成功了，转化后菌长了特别多。怎么改进一下 发自小木虫Android客户端 |
10楼2017-05-21 10:21:34