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wmwman306

禁虫 (著名写手)

[交流] SDS—PAGE电泳(蛋白电泳)【有效期至2009年1月11日】

有谁做蛋白分析啊

我的蛋白电泳出了问题:为什么跑到最后是锯齿状呢?已经重复好多次了 。


我自己做了好几方面的改进,胶溶液重配了好几次,还是那样。可能是哪方面的原因了,愁死人了。
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fjc100648

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
wmwman306(金币+5,VIP+0):谢谢! 2-18 17:03
最可能的原因是样品中有不溶的颗粒。建议离心后再取上清上样。另一种可能是胶凝固的不均匀。
2楼2009-01-17 13:58:05
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z8t8t8

金虫 (小有名气)


wmwman306(金币+1,VIP+0):谢谢! 2-18 17:04
胶凝固的不均匀
曾經の有個ヅ小釹孩~跑到ωǒ面前对ωǒ说:メ_哥哥,?煤盟禶``ωǒ上去就是两巴掌:ツ废话!
3楼2009-01-17 14:28:11
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181805776

铁虫 (正式写手)

电泳的历史和美国的历史相当,约有200年,蛋白质电泳也有100年的历史。1937年瑞典的Tiselius因对电泳定量方面的贡献而获得诺贝尔奖。以后琼脂电泳和纸电泳技术进一步发展,并与医学广泛结合。在20世纪60年代凝胶电泳的兴起,树立了电泳史上的一个里程碑,蛋白质电泳普及到生物学和医学的大部分实验室。30年前,现代双向电泳的出现,奠定了目前蓬勃发展的蛋白质组学的基础;15年前,商品化的毛细管电泳突飞猛进的发展,使电泳操作实现了自动化。

电泳对仪器设备要求不高,目前可算是已经进入千家万户。尤其是现在生物学和医学实验室中应用最普及的凝胶电泳,即使在同一实验室中,不同工作者的操作程序也可能不同。看上去,一些习惯性的细微差别对分离图谱影响不大,导致我们放松了对细节的重视。很多人认为电泳是一门技术,满足于能用就行,忽视了理论方面的重要性,以至于难以提高。经验固然重要,它是一种“量”的积累;而电泳受很多因素影响,如果一些基本概念清楚,能在脑海中经常思索和融会贯通,那么就有可能抓住一瞬间出现的灵感和火花,使你的实验出现一个“质”的飞跃!

美国Diddings研究了一种新型电泳,它是在正极和负极之间加上磁场,或者是利用高温和低温来分离蛋白质或带电胶体粒子,发表在1993年的“Science”上。后来虽然没有能形成一项能普及和广泛应用的技术,但它确是很有新意和原创性的工作。
4楼2009-01-17 18:34:45
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景魏晋

铁杆木虫 (知名作家)


wmwman306(金币+1,VIP+0):谢谢! 2-18 17:05
不均匀
努力
5楼2009-01-17 18:42:33
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yinfengzhizi

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
wmwman306(金币+7,VIP+0):非常感谢! 2-18 17:04
首先考虑是凝胶不均匀,各成分加入后,要尽量混匀再灌胶。另外要延长凝胶时间,待胶充分凝固再做后续实验
第二,上样的样品,是否充分溶解,是否上样太急,有不溶性颗粒存在。
第三,缓冲液的PH,换用其它实验室的缓冲液试一下
暂时能想到这么多,如果还不行,建议你把你的试验步骤写出来,看一下是不是其它地方出了问题。
6楼2009-01-20 10:30:17
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jiaminl

铁杆木虫 (知名作家)


wmwman306(金币+1,VIP+0):谢谢! 2-18 17:05
很可能是胶不均一
Nevergiveup!
7楼2009-01-20 10:54:11
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