应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求问PCR扩增怎么提高浓度 浓度怎么测定
222/3返回列表上一页123下一页
查看: 2541  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

阿肖肖肖

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 渊博震天 at 2017-05-15 18:59:01
如果非特异性扩增很少的话，可以采用PCR产物纯化试剂盒进行纯化，纯化后送去测序即可。

可以直接测序吗？测序浓度有要求吗

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
11楼2017-05-15 19:12:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主
引用回帖:
11楼: Originally posted by 阿肖肖肖 at 2017-05-15 22:12:07
可以直接测序吗？测序浓度有要求吗
...

可以测序，体系要大些，别让浓度过低跑不出条带。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2017-05-15 19:14:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

允隼1994

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 阿肖肖肖 at 2017-05-15 18:49:31
把胶片回收扩增才能测序吗？第一次做不太明白
...

你胶回收浓度可以的话直接就可以测序，不一定要扩增。

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
13楼2017-05-16 00:08:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

HappyKuan

银虫 (小有名气)
现在的测序公司都给做切胶回收测序，要告诉公司你的片段大小。具体细节打电话咨询

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
14楼2017-05-16 07:40:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

江边鸟

银虫 (小有名气)
加大扩增体系 可以用50ul体系 酶允许内最大扩增循环数  跑个胶看下条带，亮的单一的就可以送测序了  放完染料可以送测序的  测序浓度50ng/ul以上就可以了

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
15楼2017-05-16 11:24:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lusandanooo

银虫 (小有名气)
纯化以后就能测序，如果没有非特异性扩增就不用胶回收。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
毕了业真开心嘻嘻嘻嘻嘻
16楼2017-05-17 18:30:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阿肖肖肖

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 江边鸟 at 2017-05-16 11:24:30
加大扩增体系 可以用50ul体系 酶允许内最大扩增循环数  跑个胶看下条带，亮的单一的就可以送测序了  放完染料可以送测序的  测序浓度50ng/ul以上就可以了

如果有非特异性产物的话还能直接测序吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
17楼2017-05-20 08:50:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阿肖肖肖

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by lusandanooo at 2017-05-17 18:30:55
纯化以后就能测序，如果没有非特异性扩增就不用胶回收。

如果有非特异性产物的话能不能直接测序

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
18楼2017-05-20 08:50:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

江边鸟

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
17楼: Originally posted by 阿肖肖肖 at 2017-05-20 08:50:27
如果有非特异性产物的话还能直接测序吗？
...

可以的，告知测序公司你的目的条带大小，说明有非特异性条带，让他们电泳将条带跑开 切胶你的目的条带回收测序

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
19楼2017-05-20 10:33:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

幻影望晴

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 阿肖肖肖 at 2017-05-15 18:48:49
求问一下这样PCR扩增出来的浓度能测序吗？第一次做 不太会弄

...

可以试下适当提高退火温度，获得的单一特异性条带可以直接送测序，但测序结果可能没有克隆后的好，容易出现有套峰情况

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
20楼2017-05-20 15:32:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 阿肖肖肖 的主题更新
222/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭