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阿肖肖肖

新虫 (初入文坛)

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10楼: Originally posted by 渊博震天 at 2017-05-15 18:59:01
如果非特异性扩增很少的话,可以采用PCR产物纯化试剂盒进行纯化,纯化后送去测序即可。

可以直接测序吗?测序浓度有要求吗

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11楼2017-05-15 19:12:07
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

引用回帖:
11楼: Originally posted by 阿肖肖肖 at 2017-05-15 22:12:07
可以直接测序吗?测序浓度有要求吗
...

可以测序,体系要大些,别让浓度过低跑不出条带。

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12楼2017-05-15 19:14:15
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允隼1994

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 阿肖肖肖 at 2017-05-15 18:49:31
把胶片回收扩增才能测序吗?第一次做不太明白
...

你胶回收浓度可以的话直接就可以测序,不一定要扩增。

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13楼2017-05-16 00:08:09
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HappyKuan

银虫 (小有名气)

现在的测序公司都给做切胶回收测序,要告诉公司你的片段大小。具体细节打电话咨询

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14楼2017-05-16 07:40:26
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江边鸟

银虫 (小有名气)

加大扩增体系 可以用50ul体系 酶允许内最大扩增循环数  跑个胶看下条带,亮的单一的就可以送测序了  放完染料可以送测序的  测序浓度50ng/ul以上就可以了

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15楼2017-05-16 11:24:30
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lusandanooo

银虫 (小有名气)

纯化以后就能测序,如果没有非特异性扩增就不用胶回收。

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毕了业真开心嘻嘻嘻嘻嘻
16楼2017-05-17 18:30:55
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阿肖肖肖

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 江边鸟 at 2017-05-16 11:24:30
加大扩增体系 可以用50ul体系 酶允许内最大扩增循环数  跑个胶看下条带,亮的单一的就可以送测序了  放完染料可以送测序的  测序浓度50ng/ul以上就可以了

如果有非特异性产物的话还能直接测序吗?

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17楼2017-05-20 08:50:27
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阿肖肖肖

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
16楼: Originally posted by lusandanooo at 2017-05-17 18:30:55
纯化以后就能测序,如果没有非特异性扩增就不用胶回收。

如果有非特异性产物的话能不能直接测序

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18楼2017-05-20 08:50:51
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江边鸟

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
17楼: Originally posted by 阿肖肖肖 at 2017-05-20 08:50:27
如果有非特异性产物的话还能直接测序吗?
...

可以的,告知测序公司你的目的条带大小,说明有非特异性条带,让他们电泳将条带跑开 切胶你的目的条带回收测序

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19楼2017-05-20 10:33:48
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幻影望晴

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 阿肖肖肖 at 2017-05-15 18:48:49
求问一下这样PCR扩增出来的浓度能测序吗?第一次做 不太会弄

...

可以试下适当提高退火温度,获得的单一特异性条带可以直接送测序,但测序结果可能没有克隆后的好,容易出现有套峰情况

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20楼2017-05-20 15:32:11
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