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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求问PCR扩增怎么提高浓度 浓度怎么测定
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阿肖肖肖

新虫 (初入文坛)

[求助] 求问PCR扩增怎么提高浓度 浓度怎么测定 已有7人参与

然后放完染料（凝胶电泳用）的PCR产物能不能测序

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1楼 2017-05-15 11:44:21
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hamos3

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-15 21:51:26
PCR扩增怎么提高浓度
提高产物浓度的方法最简便的方法就是在酶允许的范围内使用最大循环数。也可以在一定范围内提高模板浓度，不过不常采用这种方法。其实最方便得到大量产物的当然还是多P几管啦！

浓度怎么测定
产物浓度的话，可以通过跟marker或其他已知浓度的DNA比较亮度差异知道一个大概的范围。
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4楼2017-05-15 14:51:00
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指甲刀小魔

新虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-15 21:51:40
加大pcr的体系 总体系用50uL的多做几管，胶回收用赛默飞或者takara的试剂盒都可以，浓度测定可用回收后用的buffer标定后，用微量分光光度计，取1uL就可以测浓度了

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5楼2017-05-15 14:53:51
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

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★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-16 07:31:43
如果非特异性扩增很少的话，可以采用PCR产物纯化试剂盒进行纯化，纯化后送去测序即可。

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10楼2017-05-15 18:59:01
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

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引用回帖:
11楼: Originally posted by 阿肖肖肖 at 2017-05-15 22:12:07
可以直接测序吗？测序浓度有要求吗
...

可以测序，体系要大些，别让浓度过低跑不出条带。

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12楼2017-05-15 19:14:15
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允隼1994

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9楼: Originally posted by 阿肖肖肖 at 2017-05-15 18:49:31
把胶片回收扩增才能测序吗？第一次做不太明白
...

你胶回收浓度可以的话直接就可以测序，不一定要扩增。

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13楼2017-05-16 00:08:09
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bigbei

新虫 (初入文坛)
做个胶回收先

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2楼2017-05-15 12:21:15
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允隼1994

新虫 (小有名气)
胶回收再扩增

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3楼2017-05-15 12:27:29
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指甲刀小魔

新虫 (小有名气)

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3楼: Originally posted by 允隼1994 at 2017-05-15 12:27:29
胶回收再扩增

胶回收产物一般扩增不出来的

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6楼2017-05-15 14:54:26
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允隼1994

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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6楼: Originally posted by 指甲刀小魔 at 2017-05-15 14:54:26
胶回收产物一般扩增不出来的
...

可以吧，我干过很多次，都没有问题的。

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7楼2017-05-15 17:06:51
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阿肖肖肖

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hamos3 at 2017-05-15 14:51:00
PCR扩增怎么提高浓度
提高产物浓度的方法最简便的方法就是在酶允许的范围内使用最大循环数。也可以在一定范围内提高模板浓度，不过不常采用这种方法。其实最方便得到大量产物的当然还是多P几管啦！

浓度怎么测 ...

求问一下这样PCR扩增出来的浓度能测序吗？第一次做 不太会弄
求问PCR扩增怎么提高浓度 浓度怎么测定



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8楼2017-05-15 18:48:49
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阿肖肖肖

新虫 (初入文坛)
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3楼: Originally posted by 允隼1994 at 2017-05-15 12:27:29
胶回收再扩增

把胶片回收扩增才能测序吗？第一次做不太明白

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9楼2017-05-15 18:49:31
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