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林子药

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 155
帖子: 2
在线: 2.4小时
虫号: 5133725
注册: 2016-10-18
性别: GG
专业: 抗肿瘤药物药理

[求助] 老师，您好，我现在做WB ，需要提取膜蛋白，但是提的膜蛋白浓... 已有1人参与

老师，您好，我现在做WB ，需要提取膜蛋白，但是提的膜蛋白浓度一直很低，用的是碧云天的膜蛋白抽提试剂盒，操作都是按照说明书来的。唯一不确定就是抽提试剂A 和B的用量，他给的是一个范围，2000万到5000万细胞用1ML A 液（加了Pmsf ），然后几步离心之后，再加200ulB
液，最后得到膜蛋白。我是用10cm 培养皿养的细胞，长到80-90%，每两个皿的细胞收集到一起按照上述操作提蛋白。然后每次提的蛋白浓度都特别低，想问一下我的浓度低和抽提试剂的用量有没有关系？还有细胞状态不好有影响吗？有时候会有小黑点，求助说是支原体污染，有时候会有部分死细胞漂浮。谢谢您

[ Last edited by 林子药 on 2017-5-8 at 11:32 ]@youlinglyw

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