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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 大家有没有这样的疑问？
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好low

新虫 (初入文坛)
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大家有没有这样的疑问？
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最近在构建干扰载体，扩增了两段目的片段，然后分别连接了T载体，在经过菌夜pcr,质粒，酶切检测之后送去测序，两个目的前段分别送了三个样共六个，测序结果目的片段一中只有一个是完全正确的，其余两个都是乱码，目的片段二有两个一模一样，还有一个与前两个相比有几个碱基不一样，同样经过了层层筛选最后测序六个中只有三个是对的，那么以后再链接后面我们所需要的载体，还是经过相同的检测，但是不会送去测序这样能保证我们转入载体的目的片段还是测序正确的目的片段吗，还有就是在扩增基因这个过程是什么原因会导致这种结果出现呢？突变？？最近链接psk载体的时候,快提，菌夜pcr都能够看到有目的条带，但是酶切就是切不开，这是什么原因呢？希望各位大神来给讲解一下其中奥妙，，，

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1楼 2017-04-29 23:48:08
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欢欢墨殇

新虫 (小有名气)
不清楚

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7楼2017-04-29 23:49:57
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好low

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 欢欢墨殇 at 2017-04-29 23:49:57
不清楚

伤心

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8楼2017-04-29 23:56:42
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guangji1113

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
链接t载体，使用的肯定是taq酶，这个酶本身就容易出现错配。建议使用高保真酶重新pcr，如果双酶切打不开的话，也有可能是引物合成的问题。

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9楼2017-04-30 16:24:50
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纳米材料7533楼
2017-04-29 23:48   回复  
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pandongzi2楼
2017-04-29 23:48   回复  
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vcn11025楼
2017-04-29 23:48   回复  
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齿轮初学者6楼
2017-04-29 23:48   回复  
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欢欢墨殇4楼
2017-04-29 23:48   回复  
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