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18115179716

金虫 (正式写手)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 1367
散金: 1034
红花: 3
沙发: 1
帖子: 441
在线: 72.2小时
虫号: 4558531
注册: 2016-03-31
性别: GG
专业: 细胞外基质

[求助] 退火温度梯度下降是为什么已有2人参与

有个pcr程序，退火温度68(-1)°C×7cycles,然后退火温度58°×25cycles，为什么刚开始七个循环退火温度要逐步下降?为什么不直接58°32cycles?

@biostar2009 发自小木虫Android客户端

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1楼 2017-04-28 15:18:08

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longqi_2007

新虫 (初入文坛)

应助: 7 (幼儿园)
金币: 52.8
红花: 2
帖子: 47
在线: 5.2小时
虫号: 1005412
注册: 2010-04-25
专业: 细胞增殖、生长与分化

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

这是touchdown PCR方法，特异性比一般PCR更好，
很多试剂盒都是用的这种方法，像一些支原体检测试剂盒就是采用的这种方法，具体可以查看炎熙生物的门户网站有说明。
http://www.biothrive.cn/Product/5102865729.html

3楼2017-04-28 21:38:38

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weebug

版主 (著名写手)

应助: 64 (初中生)
贵宾: 0.053
金币: 10876.1
散金: 63
红花: 24
帖子: 1508
在线: 453小时
虫号: 1848974
注册: 2012-06-05
专业: 生物物理、生物化学与分子
管辖: 人文社科

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

在不同温度测试引物的结合度，较低温度理论上有较多pcr产物。

天蓝蓝兮日头晒

2楼2017-04-28 17:21:43

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