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munanxiang

新虫 (初入文坛)

[求助] T载连接,菌P出来全是假阳性已有1人参与

T载连接一个融合PCR产物(3400bp左右),PCR产物经胶回收、Taq加A,纯化后与T19 simple连接,用融合片段的引物菌P,P不出来。确认T载无误,连接片段干净,那么长了那么多(100来个)转化子究竟是什么呢?是引物特异性不好,菌P的时候P不出来吗?可是融合时候P出来了啊。明天打算提质粒看下。。

@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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cai3110274

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
载体自连了?
磷酸化一下
夫天地者万物之逆旅
2楼2017-04-28 08:30:18
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munanxiang

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cai3110274 at 2017-04-28 08:30:18
载体自连了?
磷酸化一下

可是T载还会自连吗?

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3楼2017-04-28 14:53:46
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涯天一方

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by munanxiang at 2017-04-28 14:53:46
可是T载还会自连吗?
...

我也遇到了这个问题,提质粒后比预期大小小的多,酶切也验证也不对,你的结果怎么样
4楼2017-07-07 00:09:10
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munanxiang

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 涯天一方 at 2017-07-07 00:09:10
我也遇到了这个问题,提质粒后比预期大小小的多,酶切也验证也不对,你的结果怎么样...

后来换方法了。融合的没往下做。耽误了时间还没做出来。

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5楼2017-11-30 17:46:01
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O啦啦

新虫 (小有名气)

请问Taq 加A 是怎么操作的? 不做这一步 能不能连上T载呢

发自小木虫IOS客户端
6楼2019-08-16 16:14:55
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