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cxwu10016869

金虫 (著名写手)

直接用1ul或2ul菌液做模板就行

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11楼2017-04-25 22:45:46
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sun小宏宏

铜虫 (著名写手)

为啥不把菌液的dna提出来再p那样不就纯度高了

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12楼2017-04-26 11:09:32
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策权康康

新虫 (初入文坛)

菌液多稀释一下再试试看,感觉模板太多了

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13楼2017-04-26 13:16:45
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这不是拖尾严重,是大多数都没有p出来,孔里的可能是加多的菌体细胞裂解之后的蛋白
···
14楼2017-04-26 14:49:00
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lusandanooo

银虫 (小有名气)

建议做菌落PCR,挑单克隆到20ul无菌水里,取1ul做模板,10ul体系。如果片段大于1.5k1,建议用热启动酶,快速高保真的那种,比如国产擎科的金牌mix,或者takara的primer star。

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毕了业真开心嘻嘻嘻嘻嘻
15楼2017-04-26 22:10:49
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lusandanooo

银虫 (小有名气)

菌落和菌液PCR其实并不好做,酶真的很重要!!!来自一个筛单克隆筛了三个多月的人的建议。我之前构建一个载体,其实早都连上了就是验证不出来,一直也不敢送测,最后一怒之下用了takara的primer star快速高保真酶做菌落PCR,一下就P出来了。

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毕了业真开心嘻嘻嘻嘻嘻
16楼2017-04-26 22:14:59
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lv0422

新虫 (初入文坛)

可能是菌液加的多了,或者是菌液浓度大

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17楼2017-04-27 18:23:13
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feng2017nb

新虫 (初入文坛)

18楼2017-04-28 06:58:08
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那抽风的生活

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
16楼: Originally posted by lusandanooo at 2017-04-26 22:14:59
菌落和菌液PCR其实并不好做,酶真的很重要!!!来自一个筛单克隆筛了三个多月的人的建议。我之前构建一个载体,其实早都连上了就是验证不出来,一直也不敢送测,最后一怒之下用了takara的primer star快速高保真酶做 ...

我换了pfu酶就p出来了,之前用的taq酶死活p不出来。

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19楼2017-04-28 08:58:41
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宁文峰

新虫 (小有名气)

是不是 菌液放多了,影响了pcr,,胶孔里的可能是蛋白复合物什么的大分子

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所追求的不在明天,而在现在以前
20楼2017-04-29 15:34:43
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