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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 菌液pcr产物进行琼脂糖凝胶电泳，样品跑不动。
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cxwu10016869

金虫 (著名写手)
直接用1ul或2ul菌液做模板就行

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11楼2017-04-25 22:45:46
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sun小宏宏

铜虫 (著名写手)
为啥不把菌液的dna提出来再p那样不就纯度高了

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12楼2017-04-26 11:09:32
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策权康康

新虫 (初入文坛)
菌液多稀释一下再试试看，感觉模板太多了

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13楼2017-04-26 13:16:45
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这不是拖尾严重，是大多数都没有p出来，孔里的可能是加多的菌体细胞裂解之后的蛋白
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···
14楼2017-04-26 14:49:00
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lusandanooo

银虫 (小有名气)
建议做菌落PCR，挑单克隆到20ul无菌水里，取1ul做模板，10ul体系。如果片段大于1.5k1，建议用热启动酶，快速高保真的那种，比如国产擎科的金牌mix，或者takara的primer star。

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毕了业真开心嘻嘻嘻嘻嘻
15楼2017-04-26 22:10:49
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lusandanooo

银虫 (小有名气)
菌落和菌液PCR其实并不好做，酶真的很重要！！！来自一个筛单克隆筛了三个多月的人的建议。我之前构建一个载体，其实早都连上了就是验证不出来，一直也不敢送测，最后一怒之下用了takara的primer star快速高保真酶做菌落PCR，一下就P出来了。

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毕了业真开心嘻嘻嘻嘻嘻
16楼2017-04-26 22:14:59
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lv0422

新虫 (初入文坛)
可能是菌液加的多了，或者是菌液浓度大

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17楼2017-04-27 18:23:13
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feng2017nb

新虫 (初入文坛)
模板量过多

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18楼2017-04-28 06:58:08
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那抽风的生活

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by lusandanooo at 2017-04-26 22:14:59
菌落和菌液PCR其实并不好做，酶真的很重要！！！来自一个筛单克隆筛了三个多月的人的建议。我之前构建一个载体，其实早都连上了就是验证不出来，一直也不敢送测，最后一怒之下用了takara的primer star快速高保真酶做 ...

我换了pfu酶就p出来了，之前用的taq酶死活p不出来。

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19楼2017-04-28 08:58:41
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宁文峰

新虫 (小有名气)
是不是 菌液放多了，影响了pcr，，胶孔里的可能是蛋白复合物什么的大分子

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所追求的不在明天，而在现在以前
20楼2017-04-29 15:34:43
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