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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于两步PCR
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威风之狼

金虫 (小有名气)

[交流] 关于两步PCR

请问什么是两步PCR，什么情况用两步PCR，退火温度怎么设定，谢谢！
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1楼 2009-01-05 12:17:31
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yelitao1983

银虫 (小有名气)
我同学有研究两步PCR的，跟楼上说的不同，两步PCR是指省去，延伸那一步，只设置变性，退火两个步骤的循环，而且时间特短，只有1s，整个PCR用时40MIN,用来快速完成小片段的PCR反应，一般检测用，
两步PCR的延伸靠变性，退火时PCR仪温度变化延迟时间和最后的10MIN总延伸来实现。
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3楼2009-01-05 17:27:31
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
大意是指先进行第一轮扩增，然后以第一轮扩增的产物为模板进行第二轮扩增。可采用同一对引物，或不同引物，根据具体目的确定。区别于巢式PCR。通常是增加产物的量以提高PCR的灵敏度用于检出极微量的模板。也可使用一条引物获得单链PCR产物。还有就是巢式。
大概就是这个意思吧，也许有不同的解释：）
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金币是赌出来的
2楼2009-01-05 13:18:58
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
引用回帖:
Originally posted by yelitao1983 at 2009-1-5 17:27:
我同学有研究两步PCR的，跟楼上说的不同，两步PCR是指省去，延伸那一步，只设置变性，退火两个步骤的循环，而且时间特短，只有1s，整个PCR用时40MIN,用来快速完成小片段的PCR反应，一般检测用，
两步PCR的延伸靠 ...

完全正确
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会当凌绝顶，一览众山小
4楼2009-01-05 19:39:30
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