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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR扩增一直扩不出目的条带
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perfect1020

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR扩增一直扩不出目的条带已有1人参与

想要扩一个基因的全长，从转录组中找到了一部分序列，我就想验证一下这个序列，blast显示就是我要的序列，但是根据这段序列设计引物之后，一直扩不出目的条带，不知道是怎么回事，体系是cDNA0.8ul,F/R0.4,MIX5,水3.4，跑过剃度，跑过降落都不能出现目的条带，引物也换了好几对，结果还是没有，请教各位大神啊，跪求！

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1楼2017-04-11 20:38:19
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
会不会是cDNA的问题？做过阳性对照吗？
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2楼2017-04-11 21:44:52
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perfect1020

新虫 (初入文坛)
应该不是cDNA的问题，因为师兄也用的是同样的cDNA,他的能跑出条带

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3楼2017-04-12 00:34:38
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perfect1020

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2017-04-11 21:44:52
会不会是cDNA的问题？做过阳性对照吗？

应该不是cDNA的问题，师兄用同样的cDNA能跑出条带

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4楼2017-04-12 00:35:52
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cf沐晴

新虫 (正式写手)
请问cDNA是通过提RNA后反转录获得的吗？我也想验证一条转录组中的序列但是在纠结要提DNA验证还是提RNA验证。。求大神赐教

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5楼2017-07-26 16:26:00
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perfect1020

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cf沐晴 at 2017-07-26 16:26:00
请问cDNA是通过提RNA后反转录获得的吗？我也想验证一条转录组中的序列但是在纠结要提DNA验证还是提RNA验证。。求大神赐教

cDNA是提RNA然后反转录得到的

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6楼2017-07-27 16:11:45
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perfect1020

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cf沐晴 at 2017-07-26 16:26:00
请问cDNA是通过提RNA后反转录获得的吗？我也想验证一条转录组中的序列但是在纠结要提DNA验证还是提RNA验证。。求大神赐教

我觉得应该用cDNA验证

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7楼2017-07-27 16:12:46
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cf沐晴

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by perfect1020 at 2017-07-27 16:12:46
我觉得应该用cDNA验证
...

谢谢楼主，好人呐

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8楼2017-07-28 11:06:53
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yumao8510

木虫 (小有名气)
模板可以适当加多点试下

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9楼2017-07-31 09:12:19
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王查查23

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
10楼2017-07-31 19:10:13
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