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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 如何设计荧光定量pcr引物？
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jama69696

新虫 (正式写手)

[求助] 如何设计荧光定量pcr引物？ 已有2人参与

如题，分子小白，求助，我现在只会用DNAMAN设计8普通的引物，但是荧光定量pcr的产物应该是小于300bp，那我应该从哪段开始设计引物呢？？如何查找基因的内含子和外显子？？？

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1楼 2017-04-11 15:20:14
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vmp651312

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般思路：NCBI搜索基因核苷酸序列，序列里面选择CDS，复制，然后打开premer5 粘贴 ，然后想怎么设计就怎么设计了！当然，很多基因会有很多转录本，这就要选择几条转录本比对，然后在根据比对结果设计引物。
其实最简单的方法，交给引物合成公司，只要提供基因名称和genbank序列号 物种，引物公司就设计合成，引物设计不收费！我是试剂公司的，也可以合成引物，可以加我QQ：122395323详聊！
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7楼2017-04-13 14:56:49
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15927635384

新虫 (初入文坛)
我的经验real-time引物最好不要超过200吧。至于在哪一段设计就看你自己实验的目的了

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2楼2017-04-11 16:08:34
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jama69696

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 15927635384 at 2017-04-11 16:08:34
我的经验real-time引物最好不要超过200吧。至于在哪一段设计就看你自己实验的目的了

我有基因的全序列，目的就是想做这个基因表达量的变化

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3楼2017-04-11 19:47:47
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阿拉阿狸

新虫 (正式写手)
有专门网站，搜下

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晕人一枚
4楼2017-04-11 19:56:45
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