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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌液PCR有三条带 哪位大神帮助一下啊
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2年小僵尸

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌液PCR有三条带 哪位大神帮助一下啊 已有2人参与

最下面的条带大小是对的 但不知道为什么会有上面的两条带 在2K左右，退火温度是61，59，57分别设置12个循环做出来的 用来扩增cDNA的时候只有一条带 效果很好 就是做菌液PCR的时候会有三条带 试剂都做过阳性对照都是对的

菌液PCR有三条带 哪位大神帮助一下啊


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1楼 2017-04-01 17:36:40
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2年小僵尸

新虫 (初入文坛)
菌液PCR有三条带 最下面的条带大小是对的 但不知道为什么会有上面的两条带 在2K左右，退火温度是61，59，57分别设置12个循环做出来的 用来扩增cDNA的时候只有一条带 效果很好 就是做菌液PCR的时候会有三条带 试剂都做过阳性对照都是对的

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2楼2017-04-01 19:19:08
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2年小僵尸

新虫 (初入文坛)
我的目的基因是不到一千bp 拿去测序结果是一千多bp条带 blast结果和T载体的有百分之八十的匹配 和目的基因只有百分之三十的匹配

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3楼2017-04-01 23:28:04
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艰苦温度

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-02 08:33:22
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3楼: Originally posted by 2年小僵尸 at 2017-04-01 23:28:04
我的目的基因是不到一千bp 拿去测序结果是一千多bp条带 blast结果和T载体的有百分之八十的匹配 和目的基因只有百分之三十的匹配

测序结果与载体匹配度更高，可能是引物在载体上有更好的结合位点。看你的实验目的了。

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4楼2017-04-02 00:15:37
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2年小僵尸

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 艰苦温度 at 2017-04-02 00:15:37
测序结果与载体匹配度更高，可能是引物在载体上有更好的结合位点。看你的实验目的了。
...

为了保存目的基因 方便以后构建各种不同的载体  这种结果能用吗

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5楼2017-04-02 00:18:48
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艰苦温度

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-06 20:46:06
引用回帖:
5楼: Originally posted by 2年小僵尸 at 2017-04-02 00:18:48
为了保存目的基因 方便以后构建各种不同的载体  这种结果能用吗
...

建议利用载体上的通用引物测序确定基因片段序列。

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6楼2017-04-02 00:20:09
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2年小僵尸

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 艰苦温度 at 2017-04-02 00:20:09
建议利用载体上的通用引物测序确定基因片段序列。
...

测序的引物就是选择的T载体的通用引物

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7楼2017-04-02 01:11:52
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2年小僵尸

新虫 (初入文坛)
有没有人知道啊

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8楼2017-04-06 17:28:48
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wbhnan

新虫 (初入文坛)
t载体你用什么引物扩增的

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9楼2017-05-09 21:56:40
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