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18366882927

新虫 (初入文坛)

[求助] 之前做过的PCR重复不出来,求大神帮忙看一下??急!急!急!不然就得换导师了。 已有3人参与

这是设计的大肠杆菌DH5α引物

F:5,CGCGGATCCATGGCTGTTACTAATGTCG 3,
R:5,CCGCTCGAGTTAAGCGGATTTTTTCG 3,

PCR体系(25ul):
                        模板           :  2ul
                        Taq酶         : 0.125ul
                        primer         :  0.625ul
                                           :0.625ul
                      10xbuffer       : 2.5ul
                      2.5mMdNTP  :  2ul
                       dd水            : 17.125ul

条件:1.  95℃              4min
          2.  95℃              40s
               61℃              30s
               72℃              3min
          3.  72℃              10min
这是体系和条件,求大神帮忙,帮我找找原因,要崩溃了。。。。。



之前做过的PCR重复不出来,求大神帮忙看一下??急!急!急!不然就得换导师了。
年前普通Taq酶P的条带.png


之前做过的PCR重复不出来,求大神帮忙看一下??急!急!急!不然就得换导师了。-1
年前高保真酶primer starP出的条带.png


之前做过的PCR重复不出来,求大神帮忙看一下??急!急!急!不然就得换导师了。-2
年后普通taq酶P的,没有条带.png


之前做过的PCR重复不出来,求大神帮忙看一下??急!急!急!不然就得换导师了。-3
1.jpg


之前做过的PCR重复不出来,求大神帮忙看一下??急!急!急!不然就得换导师了。-4
2.jpg
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孔飞东落

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 18366882927 at 2017-03-29 10:11:32
模板是菌液,过夜摇和复摇的,应该问题不大,昨天我同学帮我p的,p出来了,我现在怀疑是不是酶的问题。
...

酶很容易出问题,有可能有人没注意就失活了
17楼2017-03-30 18:46:58
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查看全部 19 个回答

18366882927

新虫 (初入文坛)

我的基因是2600多bp,接近3kb的。

发自小木虫Android客户端
2楼2017-03-27 16:56:13
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科学小覃

木虫 (正式写手)

3k,这个片段有点大,是不是考虑一下模版可能降解了,加大模版量看看(10ul),要么重提
生物科学
3楼2017-03-27 17:28:06
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)

4楼2017-03-27 20:41:53
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