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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
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洛神惟惟

新虫 (正式写手)

[求助] 基因全长验证已有3人参与

用高保真酶做基因全长验证时,一开始全都是拖带,后来改变条件后,跑出条带了,却不是我的目的带,因为我的目的带只有393bp左右,跑出的条带有将近600bp,请问大家有谁遇到过这种情况以及遇到这种情况该如何解决,谢谢@biostar2009
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洛神惟惟

新虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2017-03-26 23:36:20
你扩增的引物是cDNA水平还是基因组水平的,如用cDNA水平的引物 且基因组有内含子,得到的就是比在cDNA上的大小要大,如果是用基因组水平的引物做验证,拖带表示引物的特异性不好,重新设计引物或者试试做touchdown  ...

首先谢谢您,我用的是cDNA水平的引物,然后模板也是用RNA反转录得到的cDNA,理论上是没有内含子的,昨天把延伸时间缩短了,分别为45s和30s,结果还是只有在600bp左右有带,这个到底是什么问题呀,

发自小木虫Android客户端
11楼2017-03-27 10:03:29
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查看全部 17 个回答

洛神惟惟

新虫 (正式写手)

2楼2017-03-26 12:04:10
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洛神惟惟

新虫 (正式写手)

3楼2017-03-26 12:04:48
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莫等闲111

版主 (知名作家)

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【答案】应助回帖

★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-03-27 06:32:36
跑出的条带有将近600bp是引物二聚体,事实上你的条带并没有跑出来;个人建议:模板浓度要合适不要过多也不要过少,自己计算好;另外退火温度自己最好做一个梯度。
站内信:http:///muchong.com/bbs/box.php评分及查找应助者发送的密码http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=7465070&fpage=1
4楼2017-03-26 12:10:28
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