应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 巢式PCR求助
51/1返回列表
查看: 3195  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

叮龙猫

新虫 (初入文坛)

[求助] 巢式PCR求助 已有3人参与

巢式PCR第一次扩了3轮，第一轮隐约看到单一条带，模板不稀释跑第二轮为smear带，第三轮以第二轮的模板稀释10倍没有条带，哪位大神能解释一下吗？后来换了引物做第二次，此次扩两轮，第一轮和第二轮都看不到条带？各位大神能否解疑？

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-03-24 22:05:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

布za

铜虫 (初入文坛)
模板稀释500倍试试

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2017-03-27 19:25:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

绝对零度的笑

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
巢式PCR产物要稀释，否则上一轮残余的引物会影响下一轮的引物退火延伸，上一轮的模板量不要超过下一轮PCR体系的2%
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2017-03-24 23:19:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

叮龙猫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 绝对零度的笑 at 2017-03-24 23:19:59
巢式PCR产物要稀释，否则上一轮残余的引物会影响下一轮的引物退火延伸，上一轮的模板量不要超过下一轮PCR体系的2%

我第二次扩的第二轮有做稀释20倍，也有不稀释的但都没有条带，每次模板都是1ul，PCR体系为25ul，我试试减少模板量。请问大神巢式PCR还有别的注意事项吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2017-03-24 23:42:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

叮龙猫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 绝对零度的笑 at 2017-03-24 23:19:59
巢式PCR产物要稀释，否则上一轮残余的引物会影响下一轮的引物退火延伸，上一轮的模板量不要超过下一轮PCR体系的2%

还有你说的模板量不超过体系的2%是指每一轮的模板量吗？还是从第二轮开始？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2017-03-24 23:54:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 299求调剂 +5 某某某某位 2026-03-21 5/250 2026-03-23 23:36 by 热情沙漠
[考研] 材料/农业专业，07/08开头均可，过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪！？！
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +8 tcxiaoxx 2026-03-20 9/450 2026-03-23 12:16 by tcxiaoxx
[考研] 298求调剂 +8 上岸6666@ 2026-03-20 8/400 2026-03-23 11:02 by laoshidan
[考研] 一志愿东华大学化学070300，求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 石河子大学（211、双一流）硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 寻找调剂 +4 倔强芒? 2026-03-21 4/200 2026-03-22 16:14 by 木托莫露露
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-20 3/150 2026-03-22 16:00 by ColorlessPI
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 初试 317 +7 半拉月丙 2026-03-20 7/350 2026-03-21 22:26 by peike
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 一志愿南昌大学，327分，材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +15 陌の森林 2026-03-18 15/750 2026-03-20 23:28 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 司空. 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:08 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +22 rare12345 2026-03-18 22/1100 2026-03-20 20:39 by zhukairuo
[考研] 一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 6/300 2026-03-19 23:46 by zcl123
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭