24小时热门版块排行榜    

查看: 3175  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

叮龙猫

新虫 (初入文坛)

[求助] 巢式PCR求助 已有3人参与

巢式PCR第一次扩了3轮,第一轮隐约看到单一条带,模板不稀释跑第二轮为smear带,第三轮以第二轮的模板稀释10倍没有条带,哪位大神能解释一下吗?后来换了引物做第二次,此次扩两轮,第一轮和第二轮都看不到条带?各位大神能否解疑?

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

布za

铜虫 (初入文坛)

9楼2017-03-27 19:25:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

绝对零度的笑

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
巢式PCR产物要稀释,否则上一轮残余的引物会影响下一轮的引物退火延伸,上一轮的模板量不要超过下一轮PCR体系的2%
2楼2017-03-24 23:19:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

叮龙猫

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 绝对零度的笑 at 2017-03-24 23:19:59
巢式PCR产物要稀释,否则上一轮残余的引物会影响下一轮的引物退火延伸,上一轮的模板量不要超过下一轮PCR体系的2%

我第二次扩的第二轮有做稀释20倍,也有不稀释的但都没有条带,每次模板都是1ul,PCR体系为25ul,我试试减少模板量。请问大神巢式PCR还有别的注意事项吗?

发自小木虫Android客户端
3楼2017-03-24 23:42:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

叮龙猫

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 绝对零度的笑 at 2017-03-24 23:19:59
巢式PCR产物要稀释,否则上一轮残余的引物会影响下一轮的引物退火延伸,上一轮的模板量不要超过下一轮PCR体系的2%

还有你说的模板量不超过体系的2%是指每一轮的模板量吗?还是从第二轮开始?

发自小木虫Android客户端
4楼2017-03-24 23:54:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 298求调剂 +5 axyz3 2026-02-28 5/250 2026-03-01 06:45 by 刘兵
[考研] 272求调剂 +4 田智友 2026-02-28 4/200 2026-03-01 06:43 by 刘兵
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +5 Soliloquy_Q 2026-02-28 8/400 2026-02-28 23:36 by xyx2012xyx
[考研] 化工专硕348,一志愿985求调剂 +4 弗格个 2026-02-28 6/300 2026-02-28 22:00 by wang_dand
[考研] 292求调剂 +3 yhk_819 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:57 by gaoxiaoniuma
[考研] 290求调剂 +5 材料专硕调剂; 2026-02-28 6/300 2026-02-28 21:40 by gaoxiaoniuma
[考博] 26申博 +4 想申博! 2026-02-26 4/200 2026-02-28 21:37 by limorning
[考研] 材料学调剂 +5 提神豆沙包 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:34 by gaoxiaoniuma
[考研] 材料类求调剂 +6 wana_kiko 2026-02-28 6/300 2026-02-28 21:20 by gaoxiaoniuma
[考研] 高分子化学与物理调剂 +4 好好好1233 2026-02-28 7/350 2026-02-28 20:42 by 好好好1233
[考研] 298求调剂 +8 人间唯你是清欢 2026-02-28 11/550 2026-02-28 20:26 by L135790
[考研] 0856材料求调剂 +10 hyf hyf hyf 2026-02-28 11/550 2026-02-28 18:50 by 无际的草原
[考研] 0856调剂 +3 刘梦微 2026-02-28 3/150 2026-02-28 13:22 by houyaoxu
[考研] 寻找调剂 +3 LYidhsjabdj 2026-02-28 3/150 2026-02-28 12:59 by miniwendy
[考研] 304求调剂 +5 曼殊2266 2026-02-28 6/300 2026-02-28 12:44 by 迷糊CCPs
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 9/450 2026-02-28 12:32 by seaskyy
[基金申请] 面上可以超过30页吧? +12 阿拉贡aragon 2026-02-22 13/650 2026-02-26 22:09 by Hahaxia
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
请填处理意见