24小时热门版块排行榜    

查看: 3463  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

叮龙猫

新虫 (初入文坛)

[求助] 巢式PCR求助 已有3人参与

巢式PCR第一次扩了3轮,第一轮隐约看到单一条带,模板不稀释跑第二轮为smear带,第三轮以第二轮的模板稀释10倍没有条带,哪位大神能解释一下吗?后来换了引物做第二次,此次扩两轮,第一轮和第二轮都看不到条带?各位大神能否解疑?

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lusandanooo

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我做巢式是会把第一轮PCR产物纯化了,然后稀释50倍作为模板,加1ul,进行第二轮PCR
毕了业真开心嘻嘻嘻嘻嘻
8楼2017-03-27 15:24:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

绝对零度的笑

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
巢式PCR产物要稀释,否则上一轮残余的引物会影响下一轮的引物退火延伸,上一轮的模板量不要超过下一轮PCR体系的2%
2楼2017-03-24 23:19:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

叮龙猫

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 绝对零度的笑 at 2017-03-24 23:19:59
巢式PCR产物要稀释,否则上一轮残余的引物会影响下一轮的引物退火延伸,上一轮的模板量不要超过下一轮PCR体系的2%

我第二次扩的第二轮有做稀释20倍,也有不稀释的但都没有条带,每次模板都是1ul,PCR体系为25ul,我试试减少模板量。请问大神巢式PCR还有别的注意事项吗?

发自小木虫Android客户端
3楼2017-03-24 23:42:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

叮龙猫

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 绝对零度的笑 at 2017-03-24 23:19:59
巢式PCR产物要稀释,否则上一轮残余的引物会影响下一轮的引物退火延伸,上一轮的模板量不要超过下一轮PCR体系的2%

还有你说的模板量不超过体系的2%是指每一轮的模板量吗?还是从第二轮开始?

发自小木虫Android客户端
4楼2017-03-24 23:54:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
信息提示
请填处理意见