应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 巢式PCR求助
111/2返回列表12下一页
查看: 3561  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

叮龙猫

新虫 (初入文坛)

[求助] 巢式PCR求助 已有3人参与

巢式PCR第一次扩了3轮，第一轮隐约看到单一条带，模板不稀释跑第二轮为smear带，第三轮以第二轮的模板稀释10倍没有条带，哪位大神能解释一下吗？后来换了引物做第二次，此次扩两轮，第一轮和第二轮都看不到条带？各位大神能否解疑？

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-03-24 22:05:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

绝对零度的笑

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
巢式PCR产物要稀释，否则上一轮残余的引物会影响下一轮的引物退火延伸，上一轮的模板量不要超过下一轮PCR体系的2%
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2017-03-24 23:19:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

绝对零度的笑

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 叮龙猫 at 2017-03-24 23:42:48
我第二次扩的第二轮有做稀释20倍，也有不稀释的但都没有条带，每次模板都是1ul，PCR体系为25ul，我试试减少模板量。请问大神巢式PCR还有别的注意事项吗？
...

主要是上一轮的残余引物会对后面的影响比较大，所以要稀释。模板量2%的意思是：如果你做第二轮PCR，体系是25ul，那么加入的第一轮的模板量不要超过0.5ul
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2017-03-25 00:32:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lusandanooo

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我做巢式是会把第一轮PCR产物纯化了，然后稀释50倍作为模板，加1ul，进行第二轮PCR
赞一下(1人) 回复此楼
毕了业真开心嘻嘻嘻嘻嘻
8楼2017-03-27 15:24:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

叮龙猫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 绝对零度的笑 at 2017-03-24 23:19:59
巢式PCR产物要稀释，否则上一轮残余的引物会影响下一轮的引物退火延伸，上一轮的模板量不要超过下一轮PCR体系的2%

我第二次扩的第二轮有做稀释20倍，也有不稀释的但都没有条带，每次模板都是1ul，PCR体系为25ul，我试试减少模板量。请问大神巢式PCR还有别的注意事项吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2017-03-24 23:42:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

叮龙猫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 绝对零度的笑 at 2017-03-24 23:19:59
巢式PCR产物要稀释，否则上一轮残余的引物会影响下一轮的引物退火延伸，上一轮的模板量不要超过下一轮PCR体系的2%

还有你说的模板量不超过体系的2%是指每一轮的模板量吗？还是从第二轮开始？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2017-03-24 23:54:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

叮龙猫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 叮龙猫 at 2017-03-24 23:54:24
还有你说的模板量不超过体系的2%是指每一轮的模板量吗？还是从第二轮开始？
...

没仔细看不好意思呀

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2017-03-25 00:01:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

叮龙猫

新虫 (初入文坛)
希望有其他大神继续解答

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2017-03-25 16:58:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

布za

铜虫 (初入文坛)
模板稀释500倍试试

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2017-03-27 19:25:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
赞一下
10楼2017-03-28 12:58:56
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
相关版块跳转 我要订阅楼主 叮龙猫 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:25 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 3/150 2026-09-14 22:24 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:12 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:01 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:00 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 21:37 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:33 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:25 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:24 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-14 21:21 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-14 17:49 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-14 17:48 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-14 17:25 by Aj1rhIDL5ixY
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-14 15:37 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-14 15:21 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 浙江师范大学是怎么坑我的 +6 recruit123 2026-09-09 6/300 2026-09-14 12:00 by 萨仁其其格
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭