应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 巢式PCR求助
111/2返回列表12下一页
查看: 3201  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

叮龙猫

新虫 (初入文坛)

[求助] 巢式PCR求助 已有3人参与

巢式PCR第一次扩了3轮，第一轮隐约看到单一条带，模板不稀释跑第二轮为smear带，第三轮以第二轮的模板稀释10倍没有条带，哪位大神能解释一下吗？后来换了引物做第二次，此次扩两轮，第一轮和第二轮都看不到条带？各位大神能否解疑？

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-03-24 22:05:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

绝对零度的笑

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
巢式PCR产物要稀释，否则上一轮残余的引物会影响下一轮的引物退火延伸，上一轮的模板量不要超过下一轮PCR体系的2%
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2017-03-24 23:19:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

绝对零度的笑

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 叮龙猫 at 2017-03-24 23:42:48
我第二次扩的第二轮有做稀释20倍，也有不稀释的但都没有条带，每次模板都是1ul，PCR体系为25ul，我试试减少模板量。请问大神巢式PCR还有别的注意事项吗？
...

主要是上一轮的残余引物会对后面的影响比较大，所以要稀释。模板量2%的意思是：如果你做第二轮PCR，体系是25ul，那么加入的第一轮的模板量不要超过0.5ul
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2017-03-25 00:32:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lusandanooo

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我做巢式是会把第一轮PCR产物纯化了，然后稀释50倍作为模板，加1ul，进行第二轮PCR
赞一下(1人) 回复此楼
毕了业真开心嘻嘻嘻嘻嘻
8楼2017-03-27 15:24:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

叮龙猫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 绝对零度的笑 at 2017-03-24 23:19:59
巢式PCR产物要稀释，否则上一轮残余的引物会影响下一轮的引物退火延伸，上一轮的模板量不要超过下一轮PCR体系的2%

我第二次扩的第二轮有做稀释20倍，也有不稀释的但都没有条带，每次模板都是1ul，PCR体系为25ul，我试试减少模板量。请问大神巢式PCR还有别的注意事项吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2017-03-24 23:42:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

叮龙猫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 绝对零度的笑 at 2017-03-24 23:19:59
巢式PCR产物要稀释，否则上一轮残余的引物会影响下一轮的引物退火延伸，上一轮的模板量不要超过下一轮PCR体系的2%

还有你说的模板量不超过体系的2%是指每一轮的模板量吗？还是从第二轮开始？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2017-03-24 23:54:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

叮龙猫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 叮龙猫 at 2017-03-24 23:54:24
还有你说的模板量不超过体系的2%是指每一轮的模板量吗？还是从第二轮开始？
...

没仔细看不好意思呀

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2017-03-25 00:01:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

叮龙猫

新虫 (初入文坛)
希望有其他大神继续解答

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2017-03-25 16:58:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

布za

铜虫 (初入文坛)
模板稀释500倍试试

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2017-03-27 19:25:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
赞一下
10楼2017-03-28 12:58:56
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
相关版块跳转 我要订阅楼主 叮龙猫 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专硕找调剂 +4 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 4/200 2026-03-24 17:45 by dick_runner
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +10 纸鱼ly 2026-03-21 11/550 2026-03-24 17:22 by qingfeng258
[考研] 一志愿河北工业大学0817化工278分求调剂 +7 jhybd 2026-03-23 12/600 2026-03-24 09:03 by jhybd
[考研] 环境学硕288求调剂 +8 皮皮皮123456 2026-03-22 8/400 2026-03-23 23:47 by 热情沙漠
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 材料专业求调剂 +11 hanamiko 2026-03-18 11/550 2026-03-23 23:12 by peike
[考研] 265求调剂 +10 梁梁校校 2026-03-17 10/500 2026-03-23 21:17 by 一切OK
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 323求调剂 +6 洼小桶 2026-03-18 6/300 2026-03-23 00:29 by king123！
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +11 枫桥ZL 2026-03-18 13/650 2026-03-22 20:26 by edmund7
[考研] 286分人工智能专业请求调剂愿意跨考！ +4 lemonzzn 2026-03-17 8/400 2026-03-21 22:49 by lemonzzn
[考研] 280求调剂 +11 咕噜晓晓 2026-03-18 12/600 2026-03-21 22:40 by ACS Nano——
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] 268求调剂 +9 简单点0 2026-03-17 9/450 2026-03-21 15:37 by lature00
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 332求调剂 +4 ydfyh 2026-03-17 4/200 2026-03-21 02:20 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭