24小时热门版块排行榜    

查看: 759  |  回复: 10
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

卡拉

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助 重叠PCR 产物中的缺失了碱基

我用重叠PCR的方法 融合了两个基因  长度分别为45 和 1740  可测序回来以后长的那个基因缺失了 36个bp  其它位置完全正确  缺的位置又不是两个基因重叠的部分 是长基因的中间的位置  接下来我又做了几次  可测序结果都是缺那30几个bp  缺的位置起始位置相同 终止的位置有几个bp的浮动  缺的位置的碱基GC含量极为的高  将近90%  求大家 帮帮我  我都做了几个月了 总是缺那些碱基 我都要疯了  郁闷之极  有找不到办法解决   求求大家指点我一下  我在这里先谢谢大家了  要不这个年 就要在郁闷中度过了
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡拉

新虫 (初入文坛)

我上一界的师姐  也是用重叠PCR的方法 双点突变 也是跟我做的相同基因 也是缺了那36了 这到底是为什么呢
3楼2008-12-28 22:06:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

月月大可

木虫 (著名写手)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
我曾经也用重叠PCR方法把一个启动子和一个功能基因连接在一起,在第二个片段的末尾部分也出现了你描述的这种情况,没有少30多个,少了10几个,也说不清楚原因。我的第二个片段也很长,在1.6K左右。
但是我也见过其他人用重叠PCR将8个片段连接起来的,人家的就很正常。不过8个片段都是比较短的那种,总长还不到1K。
2楼2008-12-28 08:56:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lliu

新虫 (小有名气)

应当不是Overlap PCR的问题。(我猜)由可能是你的序列在转入E coli里发生了同源重组后缺失。建议用RecA缺陷的E coli试试看。
4楼2008-12-29 02:06:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡拉

新虫 (初入文坛)

谢谢楼上的  你说的有道理  可我在想 是不是我PCR的过程中就丢失了呢 ?  缺失那段的GC含量很高  我想下次用GC buffer 试试 可我的退火温度该如何选择呢?  模板本身的退后温度并不高  就是50度左右  而缺失的那段的 GC含量 就高多了 那我的退火的温度该如何选择? 请大家帮帮忙.
5楼2008-12-29 23:50:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 317求调剂 +4 蛋黄咸肉粽 2026-03-26 4/200 2026-03-26 22:38 by Leeding1356
[考研] 08开头275求调剂 +3 拉谁不重要 2026-03-26 3/150 2026-03-26 20:22 by barlinike
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +17 RichLi_ 2026-03-25 17/850 2026-03-26 19:44 by plmuchong
[考研] 274求调剂 +14 顾九笙要谦虚 2026-03-24 20/1000 2026-03-26 18:15 by 乐呵呵的追梦人
[考研] 085602化学工程求调剂。 +4 平乐乐乐 2026-03-26 4/200 2026-03-26 17:57 by fmesaito
[考研] 机械学硕310分,数一英一,一志愿211本科双非找调剂信息 +3 @357 2026-03-25 3/150 2026-03-26 16:34 by by.MENG
[考研] 299求调剂 +4 15188958825 2026-03-25 4/200 2026-03-25 22:56 by 418490947
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856材料化工 | GPA 4.07 | 有科研经历 +6 cccchenso 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:25 by 544594351
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:46 by 星空星月
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 6/300 2026-03-24 15:03 by 余意卿
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 276求调剂 +3 YNRYG 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:31 by 醉在风里
[考研] 324求调剂 +6 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 6/300 2026-03-22 16:01 by ColorlessPI
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
[考研] 261求B区调剂,科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见