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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 质粒电泳图片，专家来瞅瞅
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forget1997

银虫 (小有名气)

[交流] 质粒电泳图片，专家来瞅瞅

下面是我酶切、连接、转化、涂板、细菌培养、质粒提取后的电泳图谱。有些问题请教专家。
（1）我是否得到了我要的质粒？我觉得我应该拿到了。重组的质粒明显大于空载体。但我应该如何证实？有些人说测序，有些说酶切，有些说PCR。哪个应该做？
（2）为什么我提的质粒都有三条带？这是不是因为构象的原因？还是因为细菌genomic DNA的污染？
（3）酶切之后的质粒，为什么比空载体跑得还慢？是因为构象吗？
（4）我用细菌养了很多空载体。是否将来可以用这些载体，克隆其他基因？

谢谢大家！
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1楼 2008-12-27 07:10:46
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人
★
forget1997(金币+1,VIP+0):3Q
你得到了你要的质粒，如果省事设省钱周期短，做PCR和酶切鉴定，如果等的起，不怕花钱可以测序，最有把握。
通过你的图片你的宿主细胞中是不是还有严紧型其他形式的质粒，因为如果有一种质粒，超螺旋质粒的前端不应该有条带，但你的图谱显示有。
酶切之后的质粒，比空载体跑得还慢，是因为一个是超螺旋一个是线性
可以用这些载体，克隆其他基因
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细推物理须行乐。
2楼2008-12-27 08:13:04
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forget1997

银虫 (小有名气)
谢谢楼上的。
我用的感受态细菌是XL1 blue。应该没有其他质粒。
而且constructed plasmid1和2，和空载体相比，超螺旋前面的带size还不一样。所以我觉得不是一个另外的质粒，而是质粒的另一种构象。
不过质粒除了超螺旋和开环，还有什么构象呢？
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3楼2008-12-27 09:46:08
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人
线性
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细推物理须行乐。
4楼2008-12-27 13:19:50
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