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forget1997

银虫 (小有名气)

[交流] 质粒电泳图片,专家来瞅瞅

下面是我酶切、连接、转化、涂板、细菌培养、质粒提取后的电泳图谱。有些问题请教专家。
(1)我是否得到了我要的质粒?我觉得我应该拿到了。重组的质粒明显大于空载体。但我应该如何证实?有些人说测序,有些说酶切,有些说PCR。哪个应该做?
(2)为什么我提的质粒都有三条带?这是不是因为构象的原因?还是因为细菌genomic DNA的污染?
(3)酶切之后的质粒,为什么比空载体跑得还慢?是因为构象吗?
(4)我用细菌养了很多空载体。是否将来可以用这些载体,克隆其他基因?

谢谢大家!
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人


forget1997(金币+1,VIP+0):3Q
你得到了你要的质粒,如果省事设省钱周期短,做PCR和酶切鉴定,如果等的起,不怕花钱可以测序,最有把握。
通过你的图片你的宿主细胞中是不是还有严紧型其他形式的质粒,因为如果有一种质粒,超螺旋质粒的前端不应该有条带,但你的图谱显示有。
酶切之后的质粒,比空载体跑得还慢,是因为一个是超螺旋一个是线性
可以用这些载体,克隆其他基因
细推物理须行乐。
2楼2008-12-27 08:13:04
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forget1997

银虫 (小有名气)

谢谢楼上的。
我用的感受态细菌是XL1 blue。应该没有其他质粒。
而且constructed plasmid1和2,和空载体相比,超螺旋前面的带size还不一样。所以我觉得不是一个另外的质粒,而是质粒的另一种构象。
不过质粒除了超螺旋和开环,还有什么构象呢?
3楼2008-12-27 09:46:08
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人

细推物理须行乐。
4楼2008-12-27 13:19:50
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