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jolly 1988

新虫 (初入文坛)

[交流] 丝状真菌基因敲除问题 已有2人参与

丝状真菌里氏木霉,利用线性同源重组Split-Marker的方法敲除基因,原生质体转化后得到有抗性的转化子,基因组PCR验证发现P不出任何条带,引物是选择左右臂上下游100bp左右,与Marker内部基因。感觉好奇怪啥都没扩出来,是不是没有同源整合到基因组上,求指教,急!!!

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飞雪踏春

银虫 (小有名气)


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同源重组是需要一定几率的。你的情况可能是线性片段整合到了基因组上其他位置,并没有发生重组,即没有敲除。

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2楼2017-03-14 12:37:53
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飞雪踏春

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
建议你PCR扩增一下标记基因,先确定一下是不是真的将线性片段转入菌中。如果确定转入,那么恭喜你,你只需要重复操作,继续筛了

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3楼2017-03-14 12:41:35
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jolly 1988

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 飞雪踏春 at 2017-03-14 12:41:35
建议你PCR扩增一下标记基因,先确定一下是不是真的将线性片段转入菌中。如果确定转入,那么恭喜你,你只需要重复操作,继续筛了

为啥即使没敲除成功,没同源重组上去,那我应该用左右臂的引物也会P出来跟原来菌一样的条带,可是还是啥也没有,这又是为啥?

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4楼2017-03-14 13:21:16
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前行的璐

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主,想问下里氏木霉的原生质体制备及转化的,具体的条件及操作可以分享下吗?刚接触里氏木霉
5楼2017-05-19 11:34:21
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