| 查看: 2431 | 回复: 9 | |||
[交流]
全质粒定点突变PCR,挑阳性克隆子测序，目的基因在突变点附近多了很多bp，求大神帮助
|
|||
|
本人最近在做全质粒定点饱和突变PCR 模板质粒是pET-28a，连了一个900多bp的目的基因。 目的基因的序列是 ATGGGCGCAGCACCGCAGGTTCGCACCAGTGCACCGGGCTATTATCGTATGCTGCTGGGCGACTTTGAAATCACAGCCCTGAGCGATGGCACCGTGGCCCTGCCTGTGGATAAACGTCTGAATCAGCCTGCCCCGAAAACCCAGAGTGCCCTGGCCAAGTCTTTTCAGAAGGCACCGCTGGAGACCAGCGTGACCGGCTACCTGGTGAACACCGGCAGTAAGCTGGTTCTGGTGGACACCGGCGCAGCCGGTCTGTTCGGTCCGACACTGGGTCGCCTGGCAGCCAATCTGAAAGCCGCAGGCTATCAGCCGGAACAGGTGGACGAAATCTACATCACCCACATGCACCCGGATCATGTGGGTGGCCTGATGGTGGGCGAACAGCTGGCATTTCCGAATGCAGTGGTTCGCGCCGATCAGAAAGAGGCCGATTTTTGGCTGAGCCAGACCAATCTGGATAAAGCCCCGGATGACGAGAGCAAGGGCTTTTTTAAGGGCGCTATGGCTAGCCTGAATCCGTACGTGAAAGCCGGCAAATTTAAACCGTTTAGTGGCAATACCGATCTGGTGCCGGGCATCAAAGCCCTGGCAAGCCACGGTCACACCCCGGGTCATACCACTTATGTTGTGGAGAGCCAAGGCCAAAAACTGGCCCTGCTGGGCGATCTGATTCTGGTTGCAGCCGTTCAGTTCGACGATCCGAGCGTGACCACACAGCTGGATAGCGACAGCAAAAGCGTGGCCGTGGAGCGCAAAAAAGCATTTGCCGATGCAGCCAAGGGCGGTTACCTGATTGCCGCAAGTCATCTGAGCTTTCCGGGTATCGGCCATATTCGTGCCGAAGGTAAAGGCTACCGCTTCGTGCCGGTGAACTACAGCGTGGTGAACCCGAAGCATCATCATCATCACCATTAA 引物，上游是： ACCCACATGCACNNKGATCAT 下游是：GATGTAGATTTCGTCCACCTGTTCC PCR之后，序列对比发现多了100多个碱基，而且全是在突变位点附近。重复的序列包含了引物的上下游 测序结果： GCGCAGCACCGCAGGTTCGCACCAGTGCACCGGGCTATTATCGTATGCTGCTGGGCGACTTTGAAATCACAGCCCTGAGCGATGGCACCGTGGCCCTGCCTGTGGATAAACGTCTGAATCAGCCTGCCCCGAAAACCCAGAGTGCCCTGGCCAAGTCTTTTCAGAAGGCACCGCTGGAGACCAGCGTGACCGGCTACCTGGTGAACACCGGCAGTAAGCTGGTTCTGGTGGACACCGGCGCAGCCGGTCTGTTCGGTCCGACACTGGGTCGCCTGGCAGCCAATCTGAAAGCCGCAGGCTATCAGCCGGAACAGGTGGACGAAATCTACATCCCCACATGCACGATGATCATGGAACAGGTGGACGAAATCTACATCACCCACATGCACGCTGATCATGGAACAGGTGGACGAAATCTACATCACCCACATGCACGGTGATCATGGAACAGGTGGACGAAATCTACATCACCCACATGCACCTGGATCATAGCCGGAACAGGTGGACGAAATCTACATCACCCACATGCACCAGGATCATGTCAGGCTATCAGCCGGAACAGGTGGACGAAATCTACATCACCCACATGCACCCGGATCATGTGGGTGGCCTGATGGTGGGCGAACAGCTGGCATTTCCGAATGCAGTGGTTCGCGCCGATCAGAAAGAGGCCGATTTTTGGCTGAGCCAGACCAATCTGGATAAAGCCCCGGATGACGAGAGCAAGGGCTTTTTTAAGGGCGCTATGGCTAGCCTGAATCCGTACGTGAAAGCCGGCAAATTTAAACCGTTTAGTGGCAATACCGATCTGGTGCCGGGCATCAAAGCCCTGGCAAGCCACGGTCACACCCCGGGTCATACCACTTATGTTGTGGAGAGCCAAGGCCAAAAACTGGCCCTGCTGGGCGATCTGATTCTGGTTGCAGCCGTTCAGTTCGACGATCCGAGCGTGACCACACAGCTGGATAGCGACAGCAAAAGCGTGGCCGTGGAGCGCAAAAAAGCATTTGCCGATGCAGCCAAGGGCGGTTACCTGATTGCCGCAAGTCATCTGAGCTTTCCGGGTATCGGCCATATTCGTGCCGAAGGTAAAGGCTACCGCTTCGTGCCGGTGAACTACAGCGTGGTGAACCCGAAGCATCATCATCATCACCATTAA BLAST 对比结果如图 想请问下，这是怎么回事呢？？？？？很不理解，老师也很不理解，说没遇到过。但是我和另一个做这个课题的同学都遇到了。求大神帮忙找找原因？   `)VG0ZBII[W{U9I0D7($[]N.png  F8BV`W5$K3)[@)H1{}ZQ(US.png  Q%N43ISGT8HB2LZ3]$85))B.png |
回复此楼» 猜你喜欢
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有224人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
-
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点
已经有0人回复
-
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
2026年材料结构与力学性能国际会议（MSMP 2026
+1/998
-
2026年物理学、化学与数据分析国际会议 (PCDA 2026)
+1/998
-
坐标无锡，诚征女友
+3/973
-
2027年电气工程、自动化与应用工程国际会议（EEAE 2027）
+1/867
-
2027年生物医学、农业与可持续发展国际会议（BASD 2027）
+1/856
-
2027年计算机视觉、设计与非遗文化传播国际会议（CVDC 2027）
+1/830
-
海南大学肖永昊老师团队招收2027年博士研究生（第一批）
+5/595
-
转让有机合成实验室设备
+1/100
-
石河子大学能源与材料学院李航副教授课题组招收硕、博士
+1/99
-
石河子大学能源与材料学院李航副教授课题组招收硕、博士
+1/87
-
华南师范大学胡勇军教授课题组招收2027年推荐面试攻读研究生（推免生）
+1/55
-
韩国全北国立大学禽病研究所博士研究生招生简章
+2/48
-
重庆大学机械工程团队招收2027级全脱产工程博士
+1/31
-
上海985大学专排第一的学院紧急招3位保研生做物理世界模型
+1/16
-
北航化学院彭勇教授招2027收硕士博士生
+1/13
-
澳门大学光电方向招收博士研究生
+1/12
-
大湾区大学姚瑶课题组2027届博士生招生 （与中山大学联合培养）
+1/6
-
国产CFD工业软件OpenFOAM、VirtualFlow：GPU加速与物理信息神经网络
+1/5
-
LightGBM、XGBoost梯度提升与RAG向量数据库——数据科学与智能服务工程
+1/5
-
秋季医学好刊，大量征稿
+1/4
3楼2017-03-13 08:54:27
4楼2017-03-13 09:33:23
5楼2017-03-13 15:48:28
6楼2017-03-30 07:54:48
7楼2017-04-06 16:48:05
8楼2017-08-31 08:59:31
9楼2018-04-27 11:59:52
10楼2018-08-09 20:10:24
简单回复
2017-03-12 22:47
回复
一只毛毛虫(金币+1): 谢谢参与
