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gillianwu

新虫 (初入文坛)

[求助] 三对引物同时使用,正向引物之间以及反向引物之间有重叠(不是巢式PCR),目的何在?

三对引物同时使用,正向引物之间以及反向引物之间有重叠(不是巢式PCR),目的何在?
针对一个病毒的靶基因的比较保守的区域,有人针对该区域设计引物进行实时PCR以检测该病毒,但是他同时使用了三对引物,并且正向引物之间以及反向引物之间均有几个碱基重叠(不是巢式PCR),目的何在?
对于上述做法,我的个人考虑是这样的,请大家帮忙指正:考虑到虽然是针对保守区域扩增,但是难免还是会有个别碱基突变,所以作者设计三对略有重叠的引物进行扩增,以增大包含该病毒的样品的阳性检出率?这样做以增大阳性样本的检出率理论上可行吗?如果理论上可行的话,不知道这种做法是否普遍?谢谢大家。
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mistermo

铁虫 (初入文坛)

是重叠延伸PCR,最终的结果是三对引物克隆序列以重复区为了解点全连在一起,成为一条长连,实际就是一次把三个不同位置的目的片段克隆出来,一般这三个应该是共同完成一个任务的,但是序列不在一起

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3楼2017-03-16 06:08:37
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飞翔的吉大人

新虫 (初入文坛)

2楼2017-03-15 16:47:10
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