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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 走过路过看看分子生物
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宋韬宇

新虫 (初入文坛)

[求助] 走过路过看看分子生物 已有1人参与

请大神帮助，如何解决问题
用的是takara的GXL高保真酶，跑的温度梯度，退火温度是63-66，设计的引物是63和65左右的温度梯度，跑了32个cycle，目的条带是2265,为什么就是扩不出来，谁能给个好建议。

走过路过看看分子生物


@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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1楼 2017-03-11 13:34:11
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宋韬宇

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bbass533 at 2017-03-13 16:56:02
高保真酶扩增效率不大好。你前两个孔虽然说扩增出来了但是有降解，后面2个直接就over了。换引物试试，退火温度多摸索几个吧，我一般不用温度梯度，摸索好了就单一温度退火。

嗯，先谢谢你哦。如果引物温度高，但是实际扩出来的需要的温度低有可能吗？？

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3楼2017-03-19 21:48:22
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bbass533

禁虫 (小有名气)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-03-20 06:27:32
本帖内容被屏蔽
2楼2017-03-13 16:56:02
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蔓栎天性

新虫 (初入文坛)
没有试过这个酶，但是感觉你的模板是不是降解了？

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4楼2017-03-20 00:31:36
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徐与宋

新虫 (初入文坛)
两千多本来就不好扩TM值还那么高就更难了

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5楼2017-03-20 01:25:19
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