| 查看: 1764 | 回复: 23 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
15653823606金虫 (小有名气)
Nevergiveup
|
[求助]
求助：原核表达实验已有1人参与
|
|
|
这个蛋白根据预测是不可溶蛋白 质粒构建好。测序。转化到BL21（DE3）中IPTG诱导表达。 IPTG浓度梯度 1uM/ml 0.5uM/ml 0.1uM/ml 0.05uM/ml 温度37度 2、4、6个小时取样 离心上样 结果如图所示 图一顺序 实验 对照 实验 对照 实验 对照 实验 对照 MARKER 图二顺序 实验 对照 实验 对照 marker 实验 对照 实验 对照 我觉得对照蛋白在25k 27K（两个对照蛋白）都挺准确的。应该是实验没问题。 请问：1、实验接下来，需要做些温度梯度吗？比如18度？28度？ 2、为什么脱色的时候，3个小时就脱色只剩marker，但是时间太短，又不能把胶脱无色。是需要增加上样量吗？ （我加了10ul。marker 5ul） 3、做IPTG诱导时候，所有不同浓度，温度，时间都要设置对照吗？（我目前是这样的，感觉挺麻烦，但是实际觉得对照都一样。）  IMG_2376.JPG  IMG_2377.JPG |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有115人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
求助。。。原核表达不出目的蛋白？
已经有15人回复- 关于硕士阶段实验思路的求助（VLPs的制备）
已经有2人回复
- 有人做过双报告基因的过表达质粒载体么？
已经有5人回复
- 学科分类求助---医学类
已经有4人回复
- 求助有潮霉素抗性的真菌表达载体~可拿其他的交换或者购买~
已经有0人回复
- 《序》----《zhou2009文集》
已经有24人回复
- 原核微生物转录组学
已经有17人回复
- 【求助/交流】你知道这些蛋白表达的问题吗？
已经有3人回复
- 【求助/交流】蛋白降解严重，求救！
已经有12人回复
- 【求助】H1N1亚型猪流感病毒HA基因的克隆、原核表达及表达产物的纯化
已经有2人回复
xinxiyuzhou
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 78 (初中生)
- 金币: 13452.5
- 散金: 55
- 红花: 19
- 帖子: 2045
- 在线: 425小时
- 虫号: 1304974
- 注册: 2011-05-24
- 性别: GG
- 专业: 神经生物学
|
直接用1mM吧，预测跟实际表达情况是不太一样的，你要看是可溶性还是包涵体就要超裂分别跑上清跟沉淀来看，确定是包涵体表达再调整温度，一般情况下，只做37度就够了，如果是包涵体表达，实验条件再改变也很难做成可溶性表达。跑胶是一般要做上清跟沉淀两个样品，当然还有你的未诱导的对照。还有，不用取不同时间点来做，4到6小时诱导完做就可以，要不然太浪费时间跟精力，做无用功。 发自小木虫Android客户端 |
156538236064楼2017-03-04 16:27:18
15653823606
金虫 (小有名气)
Nevergiveup
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 765.9
- 散金: 10
- 帖子: 55
- 在线: 37.6小时
- 虫号: 3476171
- 注册: 2014-10-15
- 性别: GG
- 专业: 生物海洋学与海洋生物资源
2楼2017-03-04 11:08:07
15653823606
金虫 (小有名气)
Nevergiveup
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 765.9
- 散金: 10
- 帖子: 55
- 在线: 37.6小时
- 虫号: 3476171
- 注册: 2014-10-15
- 性别: GG
- 专业: 生物海洋学与海洋生物资源
3楼2017-03-04 11:09:31
15653823606
金虫 (小有名气)
Nevergiveup
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 765.9
- 散金: 10
- 帖子: 55
- 在线: 37.6小时
- 虫号: 3476171
- 注册: 2014-10-15
- 性别: GG
- 专业: 生物海洋学与海洋生物资源
5楼2017-03-04 17:06:35