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15653823606金虫 (小有名气)
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这个蛋白根据预测是不可溶蛋白 质粒构建好。测序。转化到BL21（DE3）中IPTG诱导表达。 IPTG浓度梯度 1uM/ml 0.5uM/ml 0.1uM/ml 0.05uM/ml 温度37度 2、4、6个小时取样 离心上样 结果如图所示 图一顺序 实验 对照 实验 对照 实验 对照 实验 对照 MARKER 图二顺序 实验 对照 实验 对照 marker 实验 对照 实验 对照 我觉得对照蛋白在25k 27K（两个对照蛋白）都挺准确的。应该是实验没问题。 请问：1、实验接下来，需要做些温度梯度吗？比如18度？28度？ 2、为什么脱色的时候，3个小时就脱色只剩marker，但是时间太短，又不能把胶脱无色。是需要增加上样量吗？ （我加了10ul。marker 5ul） 3、做IPTG诱导时候，所有不同浓度，温度，时间都要设置对照吗？（我目前是这样的，感觉挺麻烦，但是实际觉得对照都一样。）  IMG_2376.JPG  IMG_2377.JPG |
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这是原核表达的PPT |
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2017-03-06 20:17:50, 2.3 M
14楼2017-03-06 20:18:19
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2楼2017-03-04 11:08:07
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3楼2017-03-04 11:09:31
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直接用1mM吧，预测跟实际表达情况是不太一样的，你要看是可溶性还是包涵体就要超裂分别跑上清跟沉淀来看，确定是包涵体表达再调整温度，一般情况下，只做37度就够了，如果是包涵体表达，实验条件再改变也很难做成可溶性表达。跑胶是一般要做上清跟沉淀两个样品，当然还有你的未诱导的对照。还有，不用取不同时间点来做，4到6小时诱导完做就可以，要不然太浪费时间跟精力，做无用功。 发自小木虫Android客户端 |
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156538236064楼2017-03-04 16:27:18