应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 新手做PCR出现问题，请各位大神帮忙解决一下
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
131/2返回列表12下一页
查看: 1872  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

贺夏

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] 新手做PCR出现问题，请各位大神帮忙解决一下 已有4人参与

用phusion DNA polymerase 做PCR,2kb和1.5kb的片段都没有出来，PCR反应条件：
98℃,30s
98℃,10s
56℃,30s
72℃,1min
72℃,10min
4℃,保存
其中第二步到第四步35个循环
1kb,0.3kb的都有产物，请各位大神帮忙解决一下，谢谢！！！！！

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2017-03-04 07:35:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

绝对零度的笑

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-03-04 22:45:58
Phusion用的Tm值可能跟其他引物不太一样，NEB网上有自动计算Tm值的网站，用他们上面算出的Tm值做做看

另外Phusion酶不要超过2U/50ul反应体系

计算Tm值的网站。或者baidu搜索“NEB Tm Calculator”
http://tmcalculator.neb.com/#!/
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2017-03-04 09:55:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

010308Jing

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
有可能退火温度太低了，phusion的退火温度还是要求比较严格的，官网上有计算退火温度的网址

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2017-03-04 14:22:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

010308Jing

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
还有50微升的体系，只需要0.5微升的酶

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2017-03-04 14:22:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinxiyuzhou

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
延伸时间不够，另外变性温度也要延长，预变性5分钟，循环里面变性30s。祝实验顺利

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2017-03-04 16:19:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

小冀-

禁虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是延伸温度啊，没用过你这个酶，不过一般的酶都是按1min1000bp来算
赞一下 回复此楼
···
2楼2017-03-04 09:14:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cjqueen

主管区长


发自小木虫Android客户端
3楼2017-03-04 09:34:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sky蒲公英

新虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
模板是cDNA吗？加的量多少？用其他的聚合酶是否试过？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
知识就像蒲公英的花儿一样，播种在世界的每一个角落。
4楼2017-03-04 09:36:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贺夏

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
4楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2017-03-04 09:36:25
模板是cDNA吗？加的量多少？用其他的聚合酶是否试过？

模板就是DNA,用TAQ酶的话，2KB的和1.5KB的都有产物

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2017-03-04 18:16:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贺夏

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
7楼: Originally posted by 010308Jing at 2017-03-04 14:22:39
还有50微升的体系，只需要0.5微升的酶

我确实只用了0.5微升的酶

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
10楼2017-03-04 18:17:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 贺夏 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 11408 321分求调剂 +3 huchun12138 2026-03-30 4/200 2026-04-01 22:48 by guanxin1001
[考研] 303分 0807学硕求调剂 +3 TYC3632 2026-04-01 3/150 2026-04-01 19:24 by lwk2004
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358 +7 cs0106 2026-04-01 8/400 2026-04-01 18:34 by 记事本2026
[考研] 生物学学硕，一志愿湖南大学，初试成绩338 +8 YYYYYNNNNN 2026-03-26 10/500 2026-04-01 14:39 by hexingyi
[考研] 302求调剂一志愿北航070300，本科郑大化学 +8 圣日耳曼条 2026-04-01 10/500 2026-04-01 14:03 by ZXlzxl0425
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +7 hanamiko 2026-03-30 7/350 2026-04-01 13:22 by JourneyLucky
[考研] 考研生物与医药调剂 +7 铁憨憨123425 2026-03-31 7/350 2026-04-01 08:45 by JourneyLucky
[考研] 求调剂：一志愿：南京大学 专业：0705 总分320 ，本科985，四六级已过 +3 lfy760306 2026-03-31 3/150 2026-04-01 01:57 by Creta
[考研] 一志愿：西北大学，英一数一408-284分求调剂 +7 12.27 2026-03-27 7/350 2026-03-31 21:59 by lbsjt
[考研] 085602 307分 求调剂 +10 不知道叫什么！ 2026-03-26 10/500 2026-03-31 19:53 by Dyhoer
[考研] 367求调剂 +7 芋泥啵啵… 2026-03-28 7/350 2026-03-31 14:55 by 不吃魚的貓
[有机交流] 甲基亚磺磺酸钠和甲基磺酸酯反应机理 10+3 kaobao456 2026-03-29 4/200 2026-03-30 23:16 by nBu锂
[考研] 哈尔滨工业大学材料与化工专硕378求调剂 +3 塔比乌斯 2026-03-30 3/150 2026-03-30 22:55 by 无际的草原
[考研] 304材料求调剂 +5 钟llll 2026-03-26 5/250 2026-03-30 19:37 by 源_2020
[考研] 材料专硕 085600求调剂 +7 BBQ233 2026-03-30 7/350 2026-03-30 17:44 by oooqiao
[考研] 本科新能源科学与工程，一志愿华理能动285求调剂 +7 AZMK 2026-03-28 11/550 2026-03-28 21:01 by xxxsssccc
[考研] 一志愿南京航空航天大学材料学硕求调剂 +3 @taotao 2026-03-28 3/150 2026-03-28 10:26 by JourneyLucky
[考研] 275求调剂 +10 jjjjjjjjjjl 2026-03-27 10/500 2026-03-27 23:47 by barnett0632
[考研] 265求调剂11408 +3 刘小鹿lu 2026-03-27 3/150 2026-03-27 20:53 by nihaoar
[考研] 324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-26 5/250 2026-03-27 10:33 by wangjy2002
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭