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MBP标签蛋白纯化 已有2人参与
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我用pMAL_c2G表达纯化蛋白，带MBP标签，用直链淀粉树脂来洗脱，但是会有很多杂蛋白洗脱下来，怎么调整才能让杂蛋白少一些？用的麦芽糖浓度为10mM,这个洗脱浓度大一些还是小一些？洗脱的速度快一些还是慢一些？怎样减少杂蛋白和柱子的结合？谢谢～ 发自小木虫Android客户端 |
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4楼2017-12-28 17:36:40
2楼2017-04-03 11:35:38
medi812
新虫 (初入文坛)
- 应助: 4 (幼儿园)
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- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
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首先任何亲和色谱的纯度都不会很高 除非你的蛋白表达量非常大 上样的时候可以稍微加快速度来降低杂志的非特异性结合 或者在你的buffer里加少量的竞争性物质来抑制那些弱的结合 洗脱过程没太大影响 可以试试稍微多洗几次 或是用很低浓度的麦芽糖洗一次 总之 亲和之后一般都需要离子交换 发自小木虫IOS客户端 |
3楼2017-04-03 21:38:56
yubeihong
铁杆木虫 (职业作家)
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- 专业: 生物化工与食品化工
5楼2019-09-20 18:24:08
130