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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 已知某个酶的编码序列片段，怎样扩得该编码序列的全长，谢谢大神们
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Gloria36

新虫 (初入文坛)

[求助] 已知某个酶的编码序列片段，怎样扩得该编码序列的全长，谢谢大神们 已有1人参与

大家好，我最近要做扩基因的全长。
我研究的菌株有亚硝酸盐还原酶，经老板送去全基因测序后预测到编码该酶的多个基因片段。
我刚结束每个预测片段的设计引物，提取菌株DNA为模板的PCR，测序后对比，验证是否与预测的序列一致。
结果是各实验得片段序列与预测序列一致。
老板现在想要我根据已知片段扩出该酶的基因全序列。
请问，我要怎么做？谢谢
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1楼 2017-02-28 15:42:10
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)
你不是已经均增出来了吗

发自小木虫IOS客户端
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2楼2017-02-28 15:56:21
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Gloria36

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 张凡云 at 2017-02-28 15:56:21
你不是已经均增出来了吗

扩增的是已经预测的片段，只是整个编码基因的几个部分，并不能拼凑出完整的序列，现在我要得到完整的编码此酶的基因序列，不知道改怎样设计实验，谢谢你。
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3楼2017-03-01 10:42:00
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snmrna

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以利用这一段序列blast出跟它最相似的且是完整的基因序列，来源跟你的菌也一致，利用这个序列设计引物可以试一下能否扩出来。否则只能做genome walking啦
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4楼2017-03-01 12:02:02
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Gloria36

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by snmrna at 2017-03-01 12:02:02
可以利用这一段序列blast出跟它最相似的且是完整的基因序列，来源跟你的菌也一致，利用这个序列设计引物可以试一下能否扩出来。否则只能做genome walking啦

好的，我试一下先，谢谢
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2017-03-03 10:32:55
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