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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR阴性对照有条带
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雪糕哦

新虫 (著名写手)

[求助] PCR阴性对照有条带 已有5人参与

研一实验刚上手，PCR的阴性对照会出现与目的基因相同大小的条带。引物、水是刚分装好的，加样时，我是先把阴性对照加好，为什么还会出现与目的片段相同大小的条带？？？？（加样顺序:水，mix，上游引物，下游引物）

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1楼 2017-02-13 23:00:43
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

keke226

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2017-02-14 06:22:04
换mix和电泳槽里的缓冲液试试看。如果都不行的话可能是被气溶胶污染了。只能换个实验台或实验室做了。

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读书廿年倦写字，如今翻书不识志，若知眷书悔前程，无如渔樵未识时。三年担柴熟山性，三年苦网谙水汹，前程在心自倦舒，识志何用书中清。
2楼2017-02-14 00:37:49
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-02-14 07:44:57
我给你三个建议：
第一，操作的器械需要高压消毒；第二，使用的试剂你必须确定没有出现污染，最好选用新鲜的；第三，操作注意枪头不能把样品滴落到阴性对照里，也不能把在样品里面用过的枪头污染阴性对照，更不能交叉插入不同试剂造成污染
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雪糕哦
奋斗是我们前进的动力！
6楼2017-02-14 06:26:48
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普通回帖

雪糕哦

新虫 (著名写手)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2017-02-14 06:22:09
引用回帖:
2楼: Originally posted by keke226 at 2017-02-14 00:37:49
换mix和电泳槽里的缓冲液试试看。如果都不行的话可能是被气溶胶污染了。只能换个实验台或实验室做了。

好，今天试试

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3楼2017-02-14 04:05:38
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kunkuncow

新虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2017-02-14 06:22:18
有没有在超净台里面操作。估计是污染了。

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4楼2017-02-14 05:45:06
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雪糕哦

新虫 (著名写手)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2017-02-14 06:22:24
引用回帖:
4楼: Originally posted by kunkuncow at 2017-02-14 05:45:06
有没有在超净台里面操作。估计是污染了。

每次都是在超净台中，使用前紫外照射半小时。。

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5楼2017-02-14 06:06:24
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雪糕哦

新虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by xn8008 at 2017-02-14 06:26:48
我给你三个建议：
第一，操作的器械需要高压消毒；第二，使用的试剂你必须确定没有出现污染，最好选用新鲜的；第三，操作注意枪头不能把样品滴落到阴性对照里，也不能把在样品里面用过的枪头污染阴性对照，更不能交 ...

感谢建议，我记下，今天再试试

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7楼2017-02-14 07:13:00
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吃货一大只
，

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8楼2017-02-14 07:39:06
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)
掉进pcr污染的深坑，每个人都要走一遭。小心再小心吧

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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
9楼2017-02-14 07:40:48
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
以前用过一批mix，本身就有一条杂带，即使不PCR直接电泳也是。
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10楼2017-02-14 09:25:39
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