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HPV病毒DNA提取流程 已有1人参与
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异丙醇 1. DNA不溶于异丙醇，加入异丙醇减少DNA溶解度，使得DNA析出。使得dna 和少量蛋白质析出产生白色絮状沉淀。降低分子运动，易于形成沉淀。静置时间越长DNA得率越高。溶液一成分：SNETSDS十二烷基磺酸钠：可破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分离 NACL 调节盐离子浓度 EDTA 螯合金属离子，抑制DNA酶 Tris盐酸 酸碱平衡 溶液二：异丙醇溶液三：灭菌注射用水。（为什么在整个DNA提取过程中沉淀DNA需要冰冷的异丙醇或者乙醇？常温的有什么样的影响？因为低温可以促进DNA的沉淀，在DNA量很少的情况（比如你的实验）可以提高抽提效率。不过如果DNA量较多时，常温也没问题） 注意事项： 1，样本离心后粘液，杂质多，用枪吸出部分溶液，尽量上清去干净。 2， 样本中血液，杂质较多时用细胞保存液，PBS，灭菌注射用水蒸馏水，清洗一遍。 3， 煮沸时切勿让管盖爆开，加热裂解的时间可适当延长到20分钟。 4， 加热后，样本离心10分钟为佳。 5， 加模板时，尽量将枪头保持在液面靠上的位置。 6， 血液，杂质较多样本加样前可按5-10倍比例稀释模板，在进行扩增。 一步法提取DNA: 特殊样本用细胞保存液清洗一遍 1,提取500UL样本 （可适量减少） 2. 14000RPM 离心7分钟，去上清 3.加入50UL 裂解液 震荡混匀 4.加热17分钟 5.14000RPM离心7分钟 6.特殊样本，模板稀释5-10倍，再加样 扩增试剂 1， 建议按人份混合酶和MIX混合液，剩余分开保存。如混合好的试剂勿反复冻融，防止酶失活。 2， pcr管有无问题，保存适当 3， 扩增仪升降温有无问题，各孔间温差，扩增程序。 杂交 1， 变性时间，冰水温度，PCR管内产物有无挥发，管底产物要浸入冰水至少2分钟。 2， 杂交时间适当延长到15min 3， 加样用枪吹打几次，使模板与杂交液混匀。 |
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