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10金币求助抑肽酶活性测定方法
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| 大家有没有做过用胰蛋白酶测定抑肽酶的活性啊（非药典中的方法），需要测吸收度的，现在只知道一个笼统的方法具体操作细节不清楚，急寻高人不吝赐教！ |
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xiefl1984 
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- 专业: 生物大分子结构与功能
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嘉笛(金币+10,VIP+0):谢谢
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将胰酶标准品配成1mg/ml的溶液，在2ml的反应缓冲液中加入20μl、40μl、60μl、80μl、100μl胰酶标准液以及80μl、60μl、40μl、20μl、0μl的重蒸水,在25℃水浴中预热15min后，加入1ml已预热的 2mM N-苯甲酰-L-精氨酸-β-萘酰胺(BAPNA)溶液，25℃水浴中准确计时5min，加入1ml 60%冰醋酸终止反应，测量A410。画出标准曲线，并计算得回归方程。 同上法在2ml的反应缓冲液中加入80μl胰酶标准液以及20μl的待测溶液，反应后测量A410。如未处于线形范围内，则将待测溶液稀释重测，直至测量值位于线形范围内。根据回归方程计算得胰酶标准液的表观体积，按照如下方程计算抑肽酶的含量。 抑肽酶活性单位（TIU/ml）= 0.0767*（80-胰酶标准液的表观体积）* 稀释倍数 活性单位定义：能将两个单位活性的胰蛋白酶抑制至50%活性的抑肽酶量定义为1个TIU单位（1个单位的胰蛋白酶在25℃、pH 7.8时每分钟能水解1.0μmol的BAPNA，一个BAPNA单位为9000 BAEE A253 单位） |
2楼2008-12-15 17:52:46
