| 查看: 3037 | 回复: 22 | ||||
[交流]
关于测序的几个问题
|
||||
|
就是一段2000bp的序列，已经连在了pbs载体上。序列基本是已知的就是为了验证一下顺便看看有没有突变之类的。学姐说现在的那个公司的测序宣传是800，实际可信的就只有600多bp。几个问题是酱紫 1，两端的测序引物似乎是公司提供的存在于载体上的引物？这是不是意味着序列的两端都是可信的，不存在引物后面一段测不准的情况呢 2，同上，如果两端的引物是在载体上，我当初扩增这段序列用的引物（还加上了保护碱基和酶切位点）就没用啦？ 3，那我大概需要新设计几个测序引物呢？位置在哪里比较合适哦 刚从实验室出来，晚上想问问公司的人明天回去再和学姐多交流下，现在坐在通勤上脑袋有点晕，希望大家能帮我理一下思路。。。 补充:看了下测序公司的引物，两端分别是T7和T3。那个这俩我在数据库上看到，他们被标为promoter啊，数据库里有其他的比如M13都被标为primer.这是这俩能够当引物用的意思吗？ 发自小木虫Android客户端 [ Last edited by 梦幻在玩 on 2017-1-14 at 18:51 ] |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白表达纯化鉴定精华 |
» 猜你喜欢
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有241人回复
-
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
-
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 处理高通量测序数据时遇到几个问题，请高手帮忙解答
已经有0人回复
- 关于测序后基因分型的一些问题。。。求大神解答！
已经有2人回复
- 关于基因家族的几个问题
已经有0人回复
- 关于微生物基因组的几个问题
已经有0人回复
- 高通量测序问题求助.
已经有1人回复
- 关于基因测序问题
已经有4人回复
- 关于基因组计划的几个简单问题
已经有1人回复
- 请教关于基因全长的问题
已经有3人回复
- 关于基因组、测序方案的问题
已经有0人回复
- 测序结果峰图观测的问题
已经有7人回复
- 关于用phusion高保真DNA聚合酶来对DNA测序的问题
已经有0人回复
- 关于454测序的一些问题
已经有0人回复
- 关于载体的问题
已经有1人回复
- 求助，关于测序峰值图全是乱峰和套峰的几个问题
已经有2人回复
- 【求助/交流】求助：关于均一化cDNA文库构建和转录组测序的问题
已经有1人回复
- 【求助/交流】关于测序的问题
已经有3人回复
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24339.7
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
1，两端的测序引物似乎是公司提供的存在于载体上的引物？这是不是意味着序列的两端都是可信的，不存在引物后面一段测不准的情况呢 你学姐说的是对的，一般双脱氧测序可以测1000bp 左右，前600-800bp 是准确的，后面的序列如果出现突变不一定真的是突变，也可能是测序的原因造成的。同时，测序时，引物结合位置处的后面约50碱基左右也是不准的，所以一般不用基因特异引物测序，而在载体上设计引物测序 2，同上，如果两端的引物是在载体上，我当初扩增这段序列用的引物（还加上了保护碱基和酶切位点）就没用啦？ 对于测序来说，用不上，载体上有通用引物，就用通用引物测序 3，那我大概需要新设计几个测序引物呢？位置在哪里比较合适哦 你需要再设计一条引物测序就够了，位置在约650bp处设计，加上载体的正反向通用引物，做3个测序反应够了，可以测通 刚从实验室出来，晚上想问问公司的人明天回去再和学姐多交流下，现在坐在通勤上脑袋有点晕，希望大家能帮我理一下思路。。。 补充:看了下测序公司的引物，两端分别是T7和T3。那个这俩我在数据库上看到，他们被标为promoter啊，数据库里有其他的比如M13都被标为primer.这是这俩能够当引物用的意思吗？ 这两个可以当通用引物，T7 的序列是特定的 发自小木虫IOS客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
梦幻在玩18楼2017-01-15 04:00:51
19楼2017-01-15 08:58:08
20楼2017-01-15 10:32:28
21楼2017-01-15 10:32:48
22楼2017-01-15 10:34:36
简单回复
chentao2楼
2017-01-14 18:27
回复
梦幻在玩(金币+2): 谢谢参与
chentao3楼
2017-01-14 18:27
回复
梦幻在玩(金币+2): 谢谢参与
qdbeer4楼
2017-01-14 18:28
回复
梦幻在玩(金币+2): 谢谢参与
1
qdbeer5楼
2017-01-14 18:28
回复
梦幻在玩(金币+2): 谢谢参与
1
tableman6楼
2017-01-14 18:32
回复
梦幻在玩(金币+2): 谢谢参与
tableman7楼
2017-01-14 18:32
回复
梦幻在玩(金币+2): 谢谢参与
假大空8楼
2017-01-14 18:32
回复
梦幻在玩(金币+2): 谢谢参与
顶
time889楼
2017-01-14 18:38
回复
梦幻在玩(金币+2): 谢谢参与
time8810楼
2017-01-14 18:38
回复
梦幻在玩(金币+2): 谢谢参与
超级老快11楼
2017-01-14 18:42
回复
梦幻在玩(金币+2): 谢谢参与
l65124012楼
2017-01-14 18:56
回复
梦幻在玩(金币+2): 谢谢参与
顶 发自小木虫Android客户端
tan91413楼
2017-01-14 18:58
回复
梦幻在玩(金币+2): 谢谢参与
tan91414楼
2017-01-14 18:58
回复
梦幻在玩(金币+2): 谢谢参与
tzynew15楼
2017-01-14 19:12
回复
梦幻在玩(金币+2): 谢谢参与
nono200916楼
2017-01-14 19:58
回复
梦幻在玩(金币+2): 谢谢参与
·
dsctg17楼
2017-01-14 20:20
回复
小兔11123楼
2017-01-15 10:54
回复