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[交流]
关于测序的几个问题
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就是一段2000bp的序列，已经连在了pbs载体上。序列基本是已知的就是为了验证一下顺便看看有没有突变之类的。学姐说现在的那个公司的测序宣传是800，实际可信的就只有600多bp。几个问题是酱紫 1，两端的测序引物似乎是公司提供的存在于载体上的引物？这是不是意味着序列的两端都是可信的，不存在引物后面一段测不准的情况呢 2，同上，如果两端的引物是在载体上，我当初扩增这段序列用的引物（还加上了保护碱基和酶切位点）就没用啦？ 3，那我大概需要新设计几个测序引物呢？位置在哪里比较合适哦 刚从实验室出来，晚上想问问公司的人明天回去再和学姐多交流下，现在坐在通勤上脑袋有点晕，希望大家能帮我理一下思路。。。 补充:看了下测序公司的引物，两端分别是T7和T3。那个这俩我在数据库上看到，他们被标为promoter啊，数据库里有其他的比如M13都被标为primer.这是这俩能够当引物用的意思吗？ 发自小木虫Android客户端 [ Last edited by 梦幻在玩 on 2017-1-14 at 18:51 ] |
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1，两端的测序引物似乎是公司提供的存在于载体上的引物？这是不是意味着序列的两端都是可信的，不存在引物后面一段测不准的情况呢 你学姐说的是对的，一般双脱氧测序可以测1000bp 左右，前600-800bp 是准确的，后面的序列如果出现突变不一定真的是突变，也可能是测序的原因造成的。同时，测序时，引物结合位置处的后面约50碱基左右也是不准的，所以一般不用基因特异引物测序，而在载体上设计引物测序 2，同上，如果两端的引物是在载体上，我当初扩增这段序列用的引物（还加上了保护碱基和酶切位点）就没用啦？ 对于测序来说，用不上，载体上有通用引物，就用通用引物测序 3，那我大概需要新设计几个测序引物呢？位置在哪里比较合适哦 你需要再设计一条引物测序就够了，位置在约650bp处设计，加上载体的正反向通用引物，做3个测序反应够了，可以测通 刚从实验室出来，晚上想问问公司的人明天回去再和学姐多交流下，现在坐在通勤上脑袋有点晕，希望大家能帮我理一下思路。。。 补充:看了下测序公司的引物，两端分别是T7和T3。那个这俩我在数据库上看到，他们被标为promoter啊，数据库里有其他的比如M13都被标为primer.这是这俩能够当引物用的意思吗？ 这两个可以当通用引物，T7 的序列是特定的 发自小木虫IOS客户端 |
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