| 查看: 2017 | 回复: 16 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
包涵体纯化重复性差已有3人参与
|
||
| 求助:本人目的蛋白大小14kd，his tag，含二硫键，表达在包涵体里。现在已经做过几次纯化，先用超声破碎，在超声洗涤3次，再用6M盐酸胍溶解，再稀释复性，透析除去盐酸胍，透析时间3~4天，在上镍柱纯化。现在纯化最高做出来1mg/ml的，但是很不稳定，有几次高点，后来再做就做不出来高浓度的了。重复性很差。我每次都做SDS-PAGE，前期包涵体处理应该没有啥问题，每次都差不多，后面纯化的SDS-PAGE显示蛋白挂柱的情况不好，我估计是复性这个环节出了问题，我做包涵体复性做的少，不知道这中间哪个步骤出了问题，想请教坛子里的大神们，帮忙分析下原因，那个环节有问题会导致后面纯化的浓度低。谢谢啦 |
回复此楼» 猜你喜欢
真诚求助：手里的省社科项目结项要求主持人一篇中文核心，有什么渠道能发核心吗
已经有6人回复
-
请问哪里可以有青B申请的本子可以借鉴一下。
已经有3人回复
-
孩子确诊有中度注意力缺陷
已经有14人回复
-
三甲基碘化亚砜的氧化反应
已经有4人回复
-
请问下大家为什么这个铃木偶联几乎不反应呢
已经有5人回复
-
请问有评职称，把科研教学业绩算分排序的高校吗
已经有5人回复
-
2025冷门绝学什么时候出结果
已经有3人回复
-
天津工业大学郑柳春团队欢迎化学化工、高分子化学或有机合成方向的博士生和硕士生加入
已经有4人回复
-
康复大学泰山学者周祺惠团队招收博士研究生
已经有6人回复
-
AI论文写作工具：是科研加速器还是学术作弊器？
已经有3人回复
wuqianqian
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 34.2
- 散金: 10
- 帖子: 45
- 在线: 10.4小时
- 虫号: 4668314
- 注册: 2016-05-08
- 性别: MM
- 专业: 临床微生物学检验
16楼2017-03-20 15:56:00