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libosa

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by 麦荟 at 2017-01-08 21:42:41
能具体告诉我你们采完水样到抽取RNA的处理步骤吗?
...

我的计划是洗膜,然后离心,然后提RNA

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11楼2017-01-09 08:38:30
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libosa

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
10楼: Originally posted by 小松鼠45 at 2017-01-09 00:11:51
装的下,我用的五升液氮罐能放三个50ML的离心管。
...

我的意思是提RNA的管装不了那么多膜,不是液氮罐装不了……

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12楼2017-01-09 08:40:13
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小松鼠45

捐助贵宾 (正式写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by libosa at 2017-01-09 08:40:13
我的意思是提RNA的管装不了那么多膜,不是液氮罐装不了……
...

多过膜,一般我提RNA,大概只用20mg能提取回收约20-50uL浓度约500ng/uL的全RNA。富集mRNA后能到1-10ng/uL,约20uL.

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13楼2017-01-09 08:58:20
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libosa

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 小松鼠45 at 2017-01-09 08:58:20
多过膜,一般我提RNA,大概只用20mg能提取回收约20-50uL浓度约500ng/uL的全RNA。富集mRNA后能到1-10ng/uL,约20uL.
...

请问你大概用多少水样?每张膜大概过多少水?

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14楼2017-01-09 09:29:23
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小松鼠45

捐助贵宾 (正式写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by libosa at 2017-01-09 09:29:23
请问你大概用多少水样?每张膜大概过多少水?
...

没确定过,就是大概20mg,在1.5ML离心管中,底部约一两颗大米粒那么多的菌体沉淀就行了。从膜上刮下来,冻存到液氮中,需要的时候液氮研磨破碎提取RNA. 研钵要提前放-30℃过夜冷冻,还要用DEPC浸泡后灭菌。

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15楼2017-01-09 09:42:56
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libosa

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
15楼: Originally posted by 小松鼠45 at 2017-01-09 09:42:56
没确定过,就是大概20mg,在1.5ML离心管中,底部约一两颗大米粒那么多的菌体沉淀就行了。从膜上刮下来,冻存到液氮中,需要的时候液氮研磨破碎提取RNA. 研钵要提前放-30℃过夜冷冻,还要用DEPC浸泡后灭菌。
...

懂了,请问你用什么把膜上的细菌刮下来

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16楼2017-01-09 09:48:22
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向阳而生ff

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 麦荟 at 2017-01-08 14:35:23
我的实验室是提取环境水样中的DNA。我们取完样品后会放一种试剂以防样品中的DNA降解。等然你也可以讲样品冷藏处理。有问题可以联系我。

请问你加的是什么试剂,还有就是你是用过滤的方法收集细菌DNA吗?为什么我过滤到0.22微米的滤膜上的时候流速超级慢,基本上是一滴一滴的往下滤。要抽好几个小时
17楼2019-05-27 14:41:14
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

0.22滤膜过滤一下,然后保存膜。
核酸提取与Taqman诊断
18楼2019-06-10 14:13:09
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