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承让了我的弟

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助涂布法计数细菌cfu的问题 已有1人参与

我是研一的学生,最近在培养大肠杆菌,在稀释的过程中操作出了问题,导致板子长菌的个数有问题,具体操作如下:LB培养基培养1比1000大肠杆菌12小时,接着相同培养基1比100培养4小时后取菌液100微升,分别1倍,2倍,4倍,8倍,10倍,16倍稀释,稀释完毕之后再逐级稀释6次(稀释10的6次方)涂版在10公分的培养基上。培养12小时数板子的点根据稀释倍数来计算cfu。我遇到的问题是:1,板子涂不匀,2,点长的十分密集,3稀释倍数大的点数反而比稀释倍数小的多。
特再次发求助帖希望各位师长能给我解惑。我自己总结是我涂版操作不熟练导致没法涂匀,但是我不知道该如何解决,一直在练手但是感觉效果不明显。但是剩下两个问题不知道原因,我想了解下涂版法的具体操作,因为和我网上查的不太一样,提前在此谢过了

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奴娃

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 承让了我的弟 at 2017-01-05 15:46:47
谢谢您的指导。。我回去试试,十分感谢
...

楼主你好
请问问题解决了吗?我也遇到和你一模一样的问题,我稀释的纯菌,稀释10的0次方、1次方、2次方,每个稀释倍数涂了2到3个平行的固体培养基,0次方的长的可数就几十个,但是1次方和2次方一大片能上千个,非
常诡异,请问楼主最后解决这个问题了吗?
只需要涂布少一点就能正常计数吗?我用的都是一次性涂布棒,用1个棒按稀释倍数由高到低(理论菌液由低到浓)涂的,每个培养皿是转的4圈左右就涂下一个板子。
目前还在找原因解决,期待楼主回复
8楼2021-09-07 19:54:21
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承让了我的弟

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
1楼: Originally posted by 承让了我的弟 at 2017-01-05 11:36:00
我是研一的学生,最近在培养大肠杆菌,在稀释的过程中操作出了问题,导致板子长菌的个数有问题,具体操作如下:LB培养基培养1比1000大肠杆菌12小时,接着相同培养基1比100培养4小时后取菌液100微升,分别1倍,2倍,4 ...

涂版菌液取的是100微升

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2楼2017-01-05 11:36:59
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樱花下的秘密

铜虫 (小有名气)

给我的感觉就是菌液没有混匀,导致你稀释的时候菌液浓度不均。菌落密集肯定就是你涂布操作的问题了,你不要来回涂布太多次,这样反而使菌分布不均了,另外最好一个浓度涂两个到三个培养皿,这样也方便你比较,希望对你有帮助

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3楼2017-01-05 14:05:48
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承让了我的弟

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 樱花下的秘密 at 2017-01-05 14:05:48
给我的感觉就是菌液没有混匀,导致你稀释的时候菌液浓度不均。菌落密集肯定就是你涂布操作的问题了,你不要来回涂布太多次,这样反而使菌分布不均了,另外最好一个浓度涂两个到三个培养皿,这样也方便你比较,希望对 ...

非常感谢您的指导!不能来回涂是么,这一点我记住了。还有就是我稀释的时候是用移液枪取100微升菌液打到装有900微升蒸馏水的1毫升离心管中,反复吹打,这样逐级稀释6次,期间要注意什么呢?感觉我吹打了很多次了,但是菌液还是没有混匀。

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4楼2017-01-05 14:53:41
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