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lxf921227

金虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR 标准品的制备 已有1人参与

各位大神好,
我最近要做几组蓝藻16s rRNA基因 的绝对定量 ,请问我的荧光定量的标准品该如何制备呢?

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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1. 先设计探针和一对引物 2 用不含探针的这对引物去扩增 3 扩增条带跑胶,条带大小正确,TA克隆,测序 4 比对正确后,测序返还的质粒,测浓度根据公式算出拷贝数 5 拷贝数稀释到十的九次方,然后依次按浓度梯度严格稀释到十的零次方。6 最后从十的零次方到十的七次方作为标准样品,上机构建标准曲线,上机时需要加上探针。
2楼2016-12-28 19:49:20
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lxf921227

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by peitaokong at 2016-12-28 19:49:20
1. 先设计探针和一对引物 2 用不含探针的这对引物去扩增 3 扩增条带跑胶,条带大小正确,TA克隆,测序 4 比对正确后,测序返还的质粒,测浓度根据公式算出拷贝数 5 拷贝数稀释到十的九次方,然后依次按浓度梯度严格 ...

谢谢  我是想用荧光染料   就不需要探针的吧

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3楼2016-12-28 21:04:50
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star013

新虫 (知名作家)


我们公司可以提供荧光定量技术服务

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4楼2016-12-29 10:16:29
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