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lxf921227

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[求助] 荧光定量PCR 标准品的制备已有1人参与

各位大神好，
我最近要做几组蓝藻16s rRNA基因的绝对定量，请问我的荧光定量的标准品该如何制备呢？

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1楼 2016-12-28 16:51:20

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peitaokong

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

1. 先设计探针和一对引物 2 用不含探针的这对引物去扩增 3 扩增条带跑胶，条带大小正确，TA克隆，测序 4 比对正确后，测序返还的质粒，测浓度根据公式算出拷贝数 5 拷贝数稀释到十的九次方，然后依次按浓度梯度严格稀释到十的零次方。6 最后从十的零次方到十的七次方作为标准样品，上机构建标准曲线，上机时需要加上探针。

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2楼2016-12-28 19:49:20

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lxf921227

金虫 (小有名气)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by peitaokong at 2016-12-28 19:49:20
1. 先设计探针和一对引物 2 用不含探针的这对引物去扩增 3 扩增条带跑胶，条带大小正确，TA克隆，测序 4 比对正确后，测序返还的质粒，测浓度根据公式算出拷贝数 5 拷贝数稀释到十的九次方，然后依次按浓度梯度严格 ...

谢谢我是想用荧光染料就不需要探针的吧

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3楼2016-12-28 21:04:50

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