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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR扩增曲线异常
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w雨过天晴j

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR扩增曲线异常 已有1人参与

现在做96孔板经常出现异常的扩增曲线，出现s型的扩增曲线，请问是什么原因？

PCR扩增曲线异常


PCR扩增曲线异常-1


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1楼 2016-12-27 10:51:32
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-28 07:43:14
你把graph type换成另一个形式，然后调一下阈值，这个曲线问题不大，出现这种情况很正常，不用担心。
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2楼2016-12-27 13:36:17
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w雨过天晴j

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by peitaokong at 2016-12-27 13:36:17
你把graph type换成另一个形式，然后调一下阈值，这个曲线问题不大，出现这种情况很正常，不用担心。

这个曲线会影响显示的Ct值，如果复孔样品都是这个样子，那么这个样品就没法统计了，

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3楼2016-12-27 17:59:27
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你先换个形式，看看曲线，然后你再调整一下阈值。调整完权限形式，你发个图
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4楼2016-12-27 18:10:35
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w雨过天晴j

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by peitaokong at 2016-12-27 18:10:35
你先换个形式，看看曲线，然后你再调整一下阈值。调整完权限形式，你发个图

调盐曲线
PCR扩增曲线异常-2



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5楼2016-12-27 21:36:52
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你把auto和autobaseline都点掉，然后analysis，你的曲线就会回归正常
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6楼2016-12-28 07:51:40
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流，请尽量一次性回帖 2016-12-30 07:42:11
然后你再把你的基线往下调整，就不会有重复性的顾虑了，然后你的CT值也会相应降为正常可接受的水平了
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7楼2016-12-28 07:53:38
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w雨过天晴j

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by peitaokong at 2016-12-28 07:51:40
你把auto和autobaseline都点掉，然后analysis，你的曲线就会回归正常

厉害果然正常了，我想问是什么原因会导致这种情况，是因为Ct值比较高表达量比较低，还是因为机器原因？

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8楼2016-12-28 20:23:42
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by w雨过天晴j at 2016-12-28 20:23:42
厉害果然正常了，我想问是什么原因会导致这种情况，是因为Ct值比较高表达量比较低，还是因为机器原因？
...

其实这种问题并不会影响我们分析实验结果。一般情况下试剂越好，排除个人加样原因，复孔的重复性就会越好。还有机器的检测问题，盖子或者膜没有封的很好，也会这样。其实这种情况并不算什么大的问题。
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9楼2016-12-29 08:56:20
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许彦

木虫 (正式写手)
有可能是背景的问题。

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10楼2016-12-29 09:20:31
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