24小时热门版块排行榜    

查看: 1487  |  回复: 9

zhangdie

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr产物一开始条带比较亮,后来再做就暗了,刚刚还出现了新产物? 已有2人参与

marker2000,目的基因1100bp,引物是师姐帮忙设计的,CG含量比较低Tm50也比较低所以特异性不高,但是跑出来了如图一,送检后说有套峰师姐让我做连接转化看看,但是后来再跑同样的pcr那个条带就暗了如图二,刚刚又跑了个40-50°c梯度的pcr(图三),结果还出了新的产物。
图三标记出的和我第一次跑的退火温度基本上一致48.2度,第一条条带没有最开始亮但位置大致是一样的,但500左右很亮。刚刚接触分子生物实验..还请指教

pcr产物一开始条带比较亮,后来再做就暗了,刚刚还出现了新产物?


pcr产物一开始条带比较亮,后来再做就暗了,刚刚还出现了新产物?-1


pcr产物一开始条带比较亮,后来再做就暗了,刚刚还出现了新产物?-2


发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guishuai_tj

铁虫 (著名写手)

我想求教楼主,第一个图的marker貌似没跑好,你是怎么调整的图二图三的marker就跑的很好,我最近跑pcr老是marker跑不好,跟你的图一很像

发自小木虫IOS客户端
哈哈
2楼2016-12-20 20:42:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangdie

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by guishuai_tj at 2016-12-20 20:42:08
我想求教楼主,第一个图的marker貌似没跑好,你是怎么调整的图二图三的marker就跑的很好,我最近跑pcr老是marker跑不好,跟你的图一很像

我的是核酸染料过期了。。要不就试试换新的缓冲液

发自小木虫Android客户端
3楼2016-12-20 22:38:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guishuai_tj

铁虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhangdie at 2016-12-20 22:38:00
我的是核酸染料过期了。。要不就试试换新的缓冲液
...

哦,我的核酸染料也过期了,只过期了一个多月,我也怀疑是这个原因,但还没买新的凑活用着

发自小木虫IOS客户端
哈哈
4楼2016-12-20 22:40:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangdie

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by guishuai_tj at 2016-12-20 22:40:41
哦,我的核酸染料也过期了,只过期了一个多月,我也怀疑是这个原因,但还没买新的凑活用着
...

我之前是明显感觉胶染完的颜色比以前浅了,换了别组的染料就好了

发自小木虫Android客户端
5楼2016-12-20 22:52:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

往生花

至尊木虫 (文坛精英)

建议连T载体,再送质粒测序

发自小木虫Android客户端
生而必争朝夕,活而必尽善美
6楼2016-12-20 23:15:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sky蒲公英

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-21 07:38:36
有二聚体,建议退火温度可以稍高一些,可以减少非特异行,另外延伸时间可以增加些,模板量可以适当加大。

发自小木虫Android客户端
知识就像蒲公英的花儿一样,播种在世界的每一个角落。
7楼2016-12-20 23:25:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生物狗-哈

新虫 (初入文坛)

退火温度可能太低了,我觉得可以引物重新设计下,可以试试Phanta高保真酶
8楼2016-12-28 15:13:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

浮笙若梦

铁虫 (初入文坛)

好好研究这个新产物,说不定被你研究出什么来了,下个诺贝尔奖获得者就是你
9楼2016-12-28 15:31:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangxp2006

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

退火温度太低,非特异性扩增产物增加。一般默认55度都能扩增的很好,不要死守TM值
10楼2016-12-28 20:41:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhangdie 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:25 by mibUvS8DDCwf
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:21 by mibUvS8DDCwf
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:12 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-14 23:24 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-14 22:37 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 3/150 2026-09-14 22:33 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:25 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:13 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:01 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:36 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:25 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:24 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-14 21:21 by vZfe6xYu34yj
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +4 两三岁ss 2026-09-14 4/200 2026-09-14 20:29 by 班主任的同桌
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-14 17:48 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-14 15:21 by Aj1rhIDL5ixY
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 3/150 2026-09-14 15:09 by Aj1rhIDL5ixY
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 3/150 2026-09-14 14:57 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
信息提示
请填处理意见