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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » EMSA看不到迁移带
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小鱼儿11

金虫 (小有名气)
★
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你的蛋白质是刚纯化的吗？

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11楼2017-01-08 21:50:08
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冰岛硫化叶菌

新虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
10楼: Originally posted by 2226451226 at 2016-12-20 12:41:49
然后还有就是蛋白质带正电还是负电
...

我的EMSA实验跟楼主有一样的情况，就是DNA的量不变，蛋白的量逐渐增加，能看到free的量随着蛋白的量增加再减少，但是很多蛋白都堵在孔中。然后我的蛋白等电点是7.5.不知道会不会有影响
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12楼2017-03-25 19:16:49
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Lily丶

铁虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
10楼: Originally posted by 2226451226 at 2016-12-20 12:41:49
然后还有就是蛋白质带正电还是负电
...

你好，请问一个问题，我也一直都在疑惑，有些蛋白质是带正电，有些事带负电，为什么都能用这个胶进行EMSA？是用什么消除蛋白质的电荷的，致使都按照DNA的方向进行电泳~
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13楼2017-09-29 08:11:41
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shiliu0422

新虫 (初入文坛)
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你好！请问你这个问题最终解决了吗？我现在也遇到了相同的问题，能看到核酸条带明显减少，但是就是没有迁移条带。荧光显色的时候胶空处能看到有条带。我的蛋白等电点是9.2，用的TBE缓冲液这有影响吗？
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14楼2017-11-23 19:58:07
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戴丽娟

新虫 (初入文坛)
★
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可能是DNA-蛋白复合物太大了，跑不出胶孔，有没有试过降低胶浓度呢？另外，想请教下EMSA跑agarose胶的方法，我做的是跑非变性聚丙烯酰胺胶
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15楼2018-01-03 16:15:21
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Jianxiao_H

金虫 (正式写手)
★
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你一个孔多少ng的DNA？
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多少辛酸不可告人。
16楼2018-01-04 00:42:53
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呆萌天狗

新虫 (正式写手)
★
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貌似好多人有同样的问题，不知楼主最终怎么解决的，我有两个类似实验，一个就可以，另外一个就和楼主一样看不到结合的条带
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17楼2018-01-19 19:38:39
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南风778

新虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
16楼: Originally posted by Jianxiao_H at 2018-01-04 00:42:53
你一个孔多少ng的DNA？

我最近做 一个泳道DNA  1.2ng/ul

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18楼2018-03-01 16:45:49
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thinkerboy

铁虫 (小有名气)
看看
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19楼2018-08-21 18:02:06
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Ok棒

新虫 (初入文坛)
★
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你好。请问你现在解决了吗。

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20楼2019-07-11 13:39:42
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