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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 有一个质粒不知道载体，只知道目的基因，我怎么才能知道用的什么载体呢？
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guoshuyuan

铁虫 (小有名气)

[求助] 有一个质粒不知道载体，只知道目的基因，我怎么才能知道用的什么载体呢？ 已有2人参与

分子小白，刚拿到一个质粒，人家不记得载体了，我只知道基因是人的，我怎么知道这是什么载体呢？

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1楼 2016-12-08 22:46:11
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

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可以转化培养后，菌液送去测序，用通用引物测就行。

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2楼2016-12-08 23:42:10
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guoshuyuan

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2016-12-08 23:42:10
可以转化培养后，菌液送去测序，用通用引物测就行。

通用引物不是有很多，我该怎么很测序公司说？

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3楼2016-12-08 23:44:49
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by guoshuyuan at 2016-12-08 23:44:49
通用引物不是有很多，我该怎么很测序公司说？
...

可以先跑电泳，看一下大概有多大，筛选出一些质粒。载体都能忘记！不行的话就自己重新构建载体，设计引物，从这个质粒上扩你的基因。

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guoshuyuan
知识就像蒲公英的花儿一样，播种在世界的每一个角落。
4楼2016-12-09 00:00:00
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guoshuyuan

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2016-12-09 00:00:00
可以先跑电泳，看一下大概有多大，筛选出一些质粒。载体都能忘记！不行的话就自己重新构建载体，设计引物，从这个质粒上扩你的基因。
...

恩，我设计了引物，菌液也有的，明天问问看公司怎么说吧，能不能测出来～～～
测序后能知道克隆选择的酶切位点吗？

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5楼2016-12-09 00:13:31
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一片云3

新虫 (小有名气)
基因靠近一段设引物，往两头测，结果和目的基因比对，多余的序列就是载体的了，然后NCBI比对，出很多载体啊标签啊之类的，让你那提供者看又熟悉的没，不行让公司测通吧

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guoshuyuan
6楼2016-12-09 00:53:34
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用目的基因的引物去测序，测完目的基因后，让他在多测一些。
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guoshuyuan
采菊东篱下，悠然见南山。
7楼2016-12-09 07:59:56
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guoshuyuan

铁虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by 781055707 at 2016-12-09 07:59:56
你用目的基因的引物去测序，测完目的基因后，让他在多测一些。

好的，谢谢

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8楼2016-12-09 10:02:15
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guoshuyuan

铁虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 一片云3 at 2016-12-09 00:53:34
基因靠近一段设引物，往两头测，结果和目的基因比对，多余的序列就是载体的了，然后NCBI比对，出很多载体啊标签啊之类的，让你那提供者看又熟悉的没，不行让公司测通吧
...

好的，谢谢

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9楼2016-12-09 10:02:29
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guoshuyuan

铁虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2016-12-09 00:00:00
可以先跑电泳，看一下大概有多大，筛选出一些质粒。载体都能忘记！不行的话就自己重新构建载体，设计引物，从这个质粒上扩你的基因。
...

好的，感谢

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10楼2016-12-09 10:02:47
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