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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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小鱼于abc

新虫 (小有名气)

[求助] 求帮忙分析下我的梯度PCR电泳图 已有1人参与

如图,我做了梯度pcr,每块胶上两个基因,都是从左到右温度升高,每个基因8个孔4个温度(一个温度两个重复)。第一块胶两端有marker,下边那块胶左端有marker。一起跑的pcr一起跑的电泳,为什么有的基因条带比较漂亮有的就那么厚呢,高度不一样啊,我第一次做梯度,不太懂。
我用的是ABI的pcr仪,电泳是1μl LoadingBuffer+4μl cDNA,100V   25min。求指教啊。
而且我看,一个基因四个温度变化,电泳图变化不是很明显的样子啊,怎么回事呢?

求帮忙分析下我的梯度PCR电泳图


@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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sky蒲公英

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知识就像蒲公英的花儿一样,播种在世界的每一个角落。
2楼2016-12-06 22:06:37
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sky蒲公英

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
温度相差不大的话,结果就不会有太大的区别

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知识就像蒲公英的花儿一样,播种在世界的每一个角落。
3楼2016-12-06 22:07:14
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小鱼于abc

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2016-12-06 22:07:14
温度相差不大的话,结果就不会有太大的区别

四个温度都是一度一度升的,这样看来就是相差不大咯

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4楼2016-12-06 22:53:09
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sky蒲公英

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【答案】应助回帖

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4楼: Originally posted by 小鱼于abc at 2016-12-06 22:53:09
四个温度都是一度一度升的,这样看来就是相差不大咯
...

可以多设几个温度进行。

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知识就像蒲公英的花儿一样,播种在世界的每一个角落。
5楼2016-12-06 23:07:08
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小鱼于abc

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2016-12-06 23:07:08
可以多设几个温度进行。
...

谢谢你这么晚还给回复。我是根据引物合成说明书上的上下游Tm设的,大于最大、小于最小的这个范围,,,我这样设,合理么

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6楼2016-12-06 23:18:08
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sky蒲公英

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【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 小鱼于abc at 2016-12-06 23:18:08
谢谢你这么晚还给回复。我是根据引物合成说明书上的上下游Tm设的,大于最大、小于最小的这个范围,,,我这样设,合理么
...

可以求其平均值,在此上下选择。我们都是50-70度进行,每两度一个梯度。

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知识就像蒲公英的花儿一样,播种在世界的每一个角落。
7楼2016-12-06 23:40:44
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小鱼于abc

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2016-12-06 23:40:44
可以求其平均值,在此上下选择。我们都是50-70度进行,每两度一个梯度。
...

哇哦,懂得了,谢谢哦

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8楼2016-12-07 07:08:05
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小鱼于abc

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2016-12-06 23:40:44
可以求其平均值,在此上下选择。我们都是50-70度进行,每两度一个梯度。
...

我又遇到问题了,那像第一个和第四个基因这样的条带,条带模糊、宽,是不是引物不够好呢,

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9楼2016-12-07 10:58:33
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sky蒲公英

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引用回帖:
9楼: Originally posted by 小鱼于abc at 2016-12-07 10:58:33
我又遇到问题了,那像第一个和第四个基因这样的条带,条带模糊、宽,是不是引物不够好呢,
...

引物设计不好,非特异性就会多。用的模板一样的话就有可能是引物的问题了。

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知识就像蒲公英的花儿一样,播种在世界的每一个角落。
10楼2016-12-07 11:09:38
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