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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 奇葩的PCR退火温度的设置
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卢家彬

木虫 (小有名气)

[交流] 奇葩的PCR退火温度的设置 已有6人参与

最近在看文献的时候发现一篇文章的PCR程序设计如下：
1×：92°C  3min.
7×：92°C  1min， 63°C  30s，58°C  50s,72°C 1min.
23×：92°C  1min， 63°C  30s，72°C  1min.
请问7×：92°C  1min， 63°C  30s，58°C  50s,72°C 1min中的63°C  30s，58°C  50s设置寓意是什麽？
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1楼 2016-12-05 10:53:02
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Neo2000

木虫 (著名写手)
★ ★
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kuaile5420: 金币+1, 欢迎交流 2016-12-08 21:11:55
少见则多怪，这样设置的目的只不过让退火更高效而已，其实引物设计的好，完全不必如此，三阶即可

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6楼2016-12-05 21:05:13
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普通回帖

月夜鸣鸣

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
该体系中是否含不同退火温度的多对引物？？

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2楼2016-12-05 14:35:27
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Ailee桑卡娜

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
设置的梯度吗？如果是梯度的话时间应该一样啊

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3楼2016-12-05 16:53:04
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Assistover

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
会不会是为了提高引物扩增条带的可能性？

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4楼2016-12-05 17:14:37
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salvador2010

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是不是Step down 循环，参见KOD
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5楼2016-12-05 20:57:38
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haimingcai

铜虫 (小有名气)
看着像降落PCR

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天天向上
7楼2016-12-06 09:16:24
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卢家彬

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 月夜鸣鸣 at 2016-12-05 14:35:27
该体系中是否含不同退火温度的多对引物？？

10多对引物
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8楼2016-12-06 10:04:01
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卢家彬

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by haimingcai at 2016-12-06 09:16:24
看着像降落PCR

不是touch down
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9楼2016-12-06 10:05:26
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卢家彬

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Neo2000 at 2016-12-05 21:05:13
少见则多怪，这样设置的目的只不过让退火更高效而已，其实引物设计的好，完全不必如此，三阶即可

我也这么认为的，因为有很多引物对，效果如何我准备验证一下
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10楼2016-12-06 10:06:34
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