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卢家彬

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[交流] 奇葩的PCR退火温度的设置已有6人参与

最近在看文献的时候发现一篇文章的PCR程序设计如下：
1×：92°C  3min.
7×：92°C  1min， 63°C  30s，58°C  50s,72°C 1min.
23×：92°C  1min， 63°C  30s，72°C  1min.
请问7×：92°C  1min， 63°C  30s，58°C  50s,72°C 1min中的63°C  30s，58°C  50s设置寓意是什麽？

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1楼 2016-12-05 10:53:02

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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Neo2000

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kuaile5420: 金币+1, 欢迎交流 2016-12-08 21:11:55

少见则多怪，这样设置的目的只不过让退火更高效而已，其实引物设计的好，完全不必如此，三阶即可

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赞一下(2人)

6楼2016-12-05 21:05:13

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普通回帖

月夜鸣鸣

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该体系中是否含不同退火温度的多对引物？？

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2楼2016-12-05 14:35:27

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设置的梯度吗？如果是梯度的话时间应该一样啊

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3楼2016-12-05 16:53:04

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Assistover

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会不会是为了提高引物扩增条带的可能性？

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4楼2016-12-05 17:14:37

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salvador2010

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是不是Step down 循环，参见KOD

5楼2016-12-05 20:57:38

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haimingcai

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看着像降落PCR

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天天向上

7楼2016-12-06 09:16:24

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卢家彬

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 月夜鸣鸣 at 2016-12-05 14:35:27
该体系中是否含不同退火温度的多对引物？？

10多对引物

8楼2016-12-06 10:04:01

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卢家彬

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引用回帖:

7楼: Originally posted by haimingcai at 2016-12-06 09:16:24
看着像降落PCR

不是touch down

9楼2016-12-06 10:05:26

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6楼: Originally posted by Neo2000 at 2016-12-05 21:05:13
少见则多怪，这样设置的目的只不过让退火更高效而已，其实引物设计的好，完全不必如此，三阶即可

我也这么认为的，因为有很多引物对，效果如何我准备验证一下

10楼2016-12-06 10:06:34

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