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菌液PCR阳性 已有3人参与
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各位大神，我最近在构建质粒的过程中，想将一个片段连到载体上，连接体系转化大肠后做以菌液为模板pcr能扩增到目的片段，但是抽质粒后以质粒为模板就扩不出来了。。目的片段比较小，只有150bp左右。。求大神指导 发自小木虫Android客户端 |
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10楼2016-11-25 08:54:12
MAS_rice
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2楼2016-11-21 22:52:31
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【答案】应助回帖
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不会菌液pcr扩出来的是基因组上的吧？还有就是质粒pcr的时候质粒不要加太多 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-11-21 23:13:39
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有的，阳性对照是拿之前连上相类似片段的质粒做模板，阴性对照是p不出片段的，然后抽完样品质粒做模板就p不出。。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-11-22 12:50:21
MAS_rice
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5楼2016-11-22 13:21:40
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质粒浓度都在100到200之间，取1ul作25ul体系的模板，阳性对照也是这样做的，考虑到模板量的确有点高，按照大神们的指导，刚刚稀释了大约100倍重新p一遍 发自小木虫Android客户端 |
6楼2016-11-22 13:37:14
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我感觉对照应该是，没有基因组为模板的为阴性对照，导入的片段为模板的为阳性对照，你们觉得呢 发自小木虫Android客户端 |
7楼2016-11-24 01:17:14
8楼2016-11-24 01:18:48
送红花一朵 |
应该不是质粒浓度的问题。稀释之后还是没有p出，然后对照就是拿之前连过相似片段的质粒做的，浓度也很高。。不过现在重新扩增了片段，重新连得，已经得到阳性结果了。谢谢大家 发自小木虫Android客户端 |
9楼2016-11-25 00:05:46